TGF-βⅡ型受體亞型在博來(lái)霉素誘導(dǎo)大鼠肺成纖維化中的表達(dá).pdf

1、目的：肺纖維化是呼吸系統(tǒng)中嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的一組疾病。它是以慢性創(chuàng)傷形成和細(xì)胞外基質(zhì)（extracelluar matrix，ECM）沉積為特點(diǎn)的疾病，進(jìn)而導(dǎo)致肺功能的破壞和出現(xiàn)呼吸衰竭。也就是說(shuō)，它是以過(guò)多的ECM產(chǎn)生和沉積為特征的疾病，這個(gè)過(guò)程通常需要很多年，并且能夠?qū)е路喂δ軗p害和喪失。目前發(fā)病機(jī)制尚不明確，臨床上缺乏有效的治療方案。盡管已形成的纖維化不可逆轉(zhuǎn)，但肺纖維化是一個(gè)進(jìn)行性慢性病理過(guò)程，探索肺纖維化發(fā)病的分子機(jī)制以尋找新

2、的干預(yù)靶點(diǎn)，對(duì)延緩或阻斷肺纖維化進(jìn)展具有重要意義。 在纖維化的發(fā)展過(guò)程中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）促纖維化的作用是肯定的。TGF-β誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞合成和積聚ECM，長(zhǎng)期以來(lái)，它被看作是一個(gè)重要的纖維化應(yīng)答調(diào)節(jié)子。TGF-β通過(guò)調(diào)控ECM生成細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平，促進(jìn)各種ECM表達(dá)，并能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞合成和分泌細(xì)胞外基質(zhì)蛋白并抑制其降解。然而，通過(guò)TGF-

3、β介導(dǎo)的纖維化應(yīng)答信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，是由TGF-β與其受體結(jié)合后來(lái)實(shí)現(xiàn)信號(hào)通路的激活，進(jìn)而誘導(dǎo)一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，實(shí)現(xiàn)它的生物學(xué)效應(yīng)。而TGF-β依賴(lài)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-βⅡ型受體（transforming growth factor-βⅡ type receptor，TGF-βRⅡ）發(fā)揮作用，只有二者在細(xì)胞表面結(jié)合后才能誘發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。研究表明，TGF-βRⅡ包括TβR-Ⅱ、ActR-Ⅱ、ActR-Ⅱ B、BMPR-Ⅱ和AMHR-Ⅱ五種亞型

4、，但究竟亞型中的哪些因子參與了肺纖維化的形成過(guò)程，目前尚未明確。本研究以博來(lái)霉素（bleomycin，BLM）誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠為模型，觀察肺纖維化過(guò)程中TGF-βRⅡ各亞型表達(dá)的變化，為今后臨床肺纖維化的治療提供干預(yù)靶點(diǎn)。 方法：1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：6周齡SD大鼠，雌性，體重180g-220g。2．動(dòng)物模型制備：大鼠經(jīng)乙醚麻醉后，頸前暴露氣管，一次性氣管內(nèi)注入0．4%BLM生理鹽水注射液（5mg/kg）。3．分組：共分兩組，每組各3

5、6只大鼠。（1）肺纖維化組（用F代表）分為6個(gè)亞組：F1、F3、F7、F14、F28、F35組，分別代表給予BLM后第1、3、7、14、28、35天后處死；（2）正常對(duì)照組（用N代表）：取同期大鼠處死。4．研究方法：應(yīng)用蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time PCR）分析肺組織中TGF-βRⅡ各亞型的表達(dá)。 結(jié)果：1．光鏡病理形態(tài)學(xué)觀察（HE染色）：肺纖維化造模成功，給予B

6、LM后第1、3、7、14、28、35天纖維化程度逐漸明顯。2．實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析各組不同階段肺組織中TGF-βRⅡ各亞型的表達(dá)變化：ActR-Ⅱ A和ActR-Ⅱ B在纖維化形成過(guò)程中表達(dá)較低，表達(dá)水平最高的階段不到正常對(duì)照組的一倍，而TβR-Ⅱ在給予BLM后第一天即處于高表達(dá)水平，隨后在第7天達(dá)到第一個(gè)高峰，繼而逐漸下降至第28天表達(dá)水平為最低狀態(tài)接近基線(xiàn)，隨后又升高，到第35天仍處于高水平。AMHR-Ⅱ在給予BLM后第1天即開(kāi)始

7、升高，至第14天達(dá)到高峰，后逐漸下降，在第28天和第35天時(shí)降之基線(xiàn)附近。纖維化組TβR-Ⅱ、ActR-Ⅱ A、ActR-Ⅱ B和AMHR-Ⅱ同正常對(duì)照組比較，P<0．05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。纖維化各組因子比較，僅TβR-Ⅱ因子與其他各因子相比，P<0．05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而其它各因子間的相互比較，P>0．05，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：1．TβR-Ⅱ、ActR-ⅡA、ActR-Ⅱ B和AMHR-Ⅱ均參與肺纖維的形成過(guò)程。2．Tβ