酶抑制法檢測(cè)蔬菜中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法研究.pdf

1、自有機(jī)氯農(nóng)藥被禁用以來(lái)，有機(jī)磷農(nóng)藥成為我國(guó)使用量最大的農(nóng)藥，廣泛使用中的有機(jī)磷農(nóng)藥品種屬于高毒性農(nóng)藥，大量使用會(huì)造成許多潛在的危害，如污染環(huán)境、藥害及人畜中毒等，尤其是由蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留所引起的中毒現(xiàn)象十分嚴(yán)重。要預(yù)防和處理有機(jī)磷農(nóng)藥引起的環(huán)境、食品污染等問(wèn)題，最有效的策略就是及時(shí)、準(zhǔn)確檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥。近年來(lái)有許多關(guān)于有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法的報(bào)道，這些快速檢測(cè)方法大都是基于酶抑制的原理。 本文利用酶抑制原理，采用植物酯

2、酶和乙酰膽堿酯酶法檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。主要包括以下五個(gè)方面的內(nèi)容： 1．綜述了酶抑制法檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法的進(jìn)展。根據(jù)酶的來(lái)源可以分為：植物酯酶法和乙酰膽堿酯酶法。在植物酯酶法中根據(jù)顯色原理的不同主要有固藍(lán)B鹽法和2，6-二氯靛酚鈉鹽法；乙酰膽堿酯酶法的顯色劑主要是DTNB顯色。乙酰膽堿酯酶比較昂貴，需要從動(dòng)物中提取，過(guò)程復(fù)雜，只能在大城市的一些超市里使用，也不可能在全國(guó)范圍內(nèi)推廣使用。植物酯酶便宜易得，提取方便，在有機(jī)磷

3、的快速測(cè)定中有更廣泛的應(yīng)用價(jià)值。 2．采用固藍(lán)B鹽法對(duì)來(lái)源于玉米粉和面粉的植物酯酶進(jìn)行比較，篩選出酶活性強(qiáng)得多的面粉酶作為檢測(cè)用酶，并對(duì)影響酶活性的條件進(jìn)行了優(yōu)化研究，確定了植物酯酶的最佳活性反應(yīng)條件是pH7.5，溫度45℃。同時(shí)還對(duì)該法檢測(cè)農(nóng)藥的各影響因子進(jìn)行了分析研究，確定了一個(gè)比較適宜的農(nóng)藥檢測(cè)反應(yīng)體系條件，并發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在0～2.5μg／mL范圍內(nèi)，三種農(nóng)藥對(duì)植物酯酶的抑制作用與農(nóng)藥濃度基本上呈現(xiàn)的是線性關(guān)系。當(dāng)以抑制率15

4、％作為檢測(cè)閾值時(shí)，樂(lè)果、敵敵畏、辛硫磷的檢出限分別為0.3、0.2、0.1mg／kg，用于實(shí)際樣品有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)時(shí)，能定性的檢測(cè)出農(nóng)藥是否超標(biāo)。 3．對(duì)2，6-二氯靛酚鈉鹽法檢測(cè)農(nóng)藥含量的各影響因子進(jìn)行了分析研究，發(fā)現(xiàn)結(jié)果與固藍(lán)B鹽法相類似，確定了適合該方法的各個(gè)反應(yīng)條件，并發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在0～2.5μg／mL范圍內(nèi)，三種農(nóng)藥對(duì)植物酯酶的抑制作用與農(nóng)藥濃度基本上呈現(xiàn)的也是線性關(guān)系。該方法與國(guó)標(biāo)相比，結(jié)果的靈敏度不夠高，主要原因可能是提

5、取的酶未經(jīng)純化所致，但當(dāng)以吸光度0.5～0.6作為檢測(cè)閾值時(shí)，該方法的樂(lè)果、敵敵畏、辛硫磷的檢出限都在國(guó)標(biāo)同種方法的檢出限范圍內(nèi)。 4．對(duì)乙酰膽堿酯酶活性的影響條件進(jìn)行了優(yōu)化研究，確定了乙酰膽堿酯酶的最佳活性反應(yīng)條件是pH8.0，溫度45℃。同時(shí)還對(duì)乙酰膽堿酯酶法檢測(cè)農(nóng)藥的各影響因子進(jìn)行了分析研究，確定了一個(gè)適宜的農(nóng)藥檢測(cè)反應(yīng)體系，并發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在1.0×10〈'-4〉～1.0μg／mL范圍內(nèi)，三種農(nóng)藥對(duì)植物酯酶的抑制作用與農(nóng)藥濃度

6、呈線性關(guān)系。當(dāng)以抑制率15％作為檢測(cè)閾值時(shí)，樂(lè)果、敵敵畏、辛硫磷的檢出限的數(shù)量級(jí)在10<’-4>mg/kg，其靈敏度高于植物酯酶法。 5．測(cè)定兩種酶的各種檢測(cè)方法的平均回收率，并進(jìn)行實(shí)際蔬菜樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)這兩種酶方法對(duì)于有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)的初步篩選都是可行的，兩種方法的回收率基本上都在83.14％～114.8％之間，在要求的范圍之內(nèi)。只有在固藍(lán)B鹽法測(cè)定辛硫磷時(shí)，回收率為79.99％，接近80％，而且變異系數(shù)不