動物膽堿酯酶的制備及其在有機磷農藥殘留快速檢測中的應用.pdf

1、本論文利用膽堿酯酶活性可被有機磷農藥所抑制的毒理機制，采用酶抑制分光光法對農產品中有機磷農藥殘留進行快速檢測。針對目前這種快速檢測方法所使用的膽堿酯酶尚無標準的制劑且不同來源的酶制劑酶活性差別大，影響檢測效果的問題，以不同來源的動物膽堿酯酶為試材，通過對膽堿酯酶的活性和耐藏性的比較及其它特性的綜合分析，篩選出來源充足、酶活高、耐保藏的酶源；針對酶抑制分光光度法使用的膽堿酯酶的純度直接決定檢測效果，試驗將篩選出的動物膽堿酯酶進行分離純化，

2、提純出一種靈敏度及純度高的膽堿酯酶；通過對不同處理的膽堿酯酶耐藏性的比較和保存方法的篩選研究，確定膽堿酯酶制劑的適宜制備方法；通過對膽堿酯酶包裝材料的篩選研究，確定適宜的酶制劑的包裝材料。具體膽堿酯酶的分離純化步驟：粗酶液經硫酸銨飽和溶液鹽析后透析，再經DEAE-52離子交換層析和Sephadex G-100凝膠過濾層析。研究結果表明，不同動物來源的膽堿酯酶酶活力存在差異，馬血清中的膽堿酯酶的酶活力明顯高于其它動物來源的酶活力，綜合考慮

3、不同酶源的酶活、來源充足性、取材方便性、保藏性等因素，篩選出馬血清作為適宜酶源。通過對純化后的膽堿酯酶性質研究得出酶的適宜反應溫度為35℃，適宜pH值為7.5，對底物氯化乙酰膽堿的K<,m>值為0.192mmol/L，適宜底物濃度為4mmol/L，高濃度底物對酶有抑制作用，該酶對熱不穩(wěn)定。敵敵畏、敵百蟲和辛硫磷對膽堿酯酶的抑制中濃度分別為0.061mg/kg、0.260mg/kg、0.204mg/kg；真空冷凍干燥法制作酶粉制劑效果較佳

4、，酶制劑采用硫酸紙包裝，在-20～25℃條件下保存。 將本試驗所制備的膽堿酯酶制劑應用到蔬菜中農藥殘留的檢測，并對酶抑制分光光度法快速檢測蔬菜中有機磷農藥殘留的檢測條件進行了篩選研究，利用該方法進行了市場抽樣檢測，結果表明，提取純化的馬血清膽堿酯酶制劑可用于蔬菜中有機磷類農藥殘留的快速測定，檢測限可達0.023mg/kg，可以滿足國家規(guī)定的蔬菜中有機磷農藥殘留檢測的要求；通過正交試驗確定檢測敵敵畏的適宜條件為：抑制時間15min

5、，抑制溫度35℃，底物用量0.1mL，酶液用量0.1mL；檢測敵百蟲的適宜條件為：抑制時間20min，抑制溫度35℃，底物用量0.1mL，酶液用量0.1mL；檢測辛硫磷的適宜條件為抑制時間20min，抑制溫度35℃，底物用量0.1mL，酶液用量0.1mL，以敵百蟲和辛硫磷為抑制劑其抑制效果不如敵敵畏的好，在檢測敵百蟲和辛硫磷農藥殘留時可將抑制時間適當?shù)难娱L。在市場抽樣調查幾種蔬菜有機磷農藥殘留狀況中，小白菜和黃瓜的污染狀況較為嚴重，生菜