11p15.5染色體區(qū)相關印記基因igf2和tssc3在骨肉瘤中的表達及調控機制研究

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文11p15.5染色體區(qū)相關印記基因IGF-2和TSSC3在骨肉瘤中的表達及調控機制研究姓名：李懿申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：郭喬楠20090501第三軍醫(yī)大學博七學位論文位于人1 1 p 1 5 ．5 染色體區(qū)，我們推測1 1 p 1 5 ．5 染色體區(qū)與骨肉瘤發(fā)生密切相關。為了明確位于1 1 p 1 5 區(qū)的這些差異表達的印記基因在骨肉瘤中的作用及調控機制，本研究選擇母本印記的I G F

2、 ．2 基因和父本印記的T s S C 3 基因進一步深入研究。I G F 一2 基因，編碼一種絲裂原蛋白肽，參與胚胎發(fā)育、細胞分化等多種生理過程。人I G F ．2 基因包含4 個不同的啟動子( P 1 ．P 4 ) ，呈發(fā)育階段和組織特異性的表達。在人類上皮性腫瘤和某些肉瘤中，I G F ．2 基因過度表達，胚胎源性的P 3 和P 4 啟動子活性上調，與印記丟失、差異甲基化區(qū)域和啟動子區(qū)域的低甲基化相關。在骨肉瘤中也有I G F 一

3、2 基因高表達與P 3 和P 4 啟動子特異轉錄本表達上調相關的報道，但誰是骨肉瘤發(fā)生中的優(yōu)勢啟動子，其表達調控的機制如何，目前尚不清楚。T S S C 3 基因，又名口L 基因，是第一個被報道的凋亡相關印記基因，位于1 1 p 1 5抑癌基因區(qū)，推測其有抑制生長的效應。目前僅在W i l m s ’腫瘤、完全性葡萄胎和惡性膠質瘤中有表達缺失的報道，但在骨肉瘤中T S S C 3 基因的表達如何，參與印記形成的D N A 甲基化機制是否

4、與其表達相關，目前尚缺乏相關研究。為此，本實驗分兩部分進行：第一部分擬通過免疫組化、R T - P C R 技術檢測骨肉瘤中I G F ．2 基因及其相關啟動子特異轉錄本的表達，以明確骨肉瘤中I G F ．2 基因的優(yōu)勢啟動子，并采用R F L P 和B S P方法檢測I G F ．2 基因的印記狀態(tài)和相關區(qū)域的甲基化表型，目的在于闡明骨肉瘤特異的I G F ．2 轉錄本相關的調控機制。第二部分擬采用R P P C R 方法檢測骨肉瘤組

5、織和骨肉瘤細胞株中T S S C 3 基因的表達，并用D N A 甲基轉移酶抑制劑5 ．A z a —C d R 處理骨肉瘤細胞，檢測其對骨肉瘤細胞生物學活性的影響，分析T S S C 3 基因表達與啟動子甲基化表型的相關性，接著對T S S C 3 基因的功能進行初步研究，目的在于闡明骨肉瘤中T s S C 3 基因的表達調控機制及可能的抑癌基因作用，為骨肉瘤的表遺傳學治療提供理論基礎。主要的結果如下：1 ．免疫組化方法檢測顯示：骨肉

6、瘤組織中I G F ．2 蛋白表達的陽性率為8 3 ．3 ％( 2 0 ／2 4 ) ，I G F ．2 蛋白的表達在骨肉瘤病理組織學分型、性別和年齡中的差異無明顯統(tǒng)計學意義( P > O ．0 5 ) 。2 ．R T - P C R 方法檢測顯示：2 0 例I G F 一2 陽性的骨肉瘤標本中，I G F ．2 基因成人源性的P l 啟動子表達豐度為O ．1 2 ±o ．0 3 ，胚胎源性的P 3 啟動子表達豐度為1