11p15.5染色體區(qū)相關(guān)印記基因igf2和tssc3在骨肉瘤中的表達(dá)及調(diào)控機(jī)制研究

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文11p15.5染色體區(qū)相關(guān)印記基因IGF-2和TSSC3在骨肉瘤中的表達(dá)及調(diào)控機(jī)制研究姓名：李懿申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：郭喬楠20090501第三軍醫(yī)大學(xué)博七學(xué)位論文位于人1 1 p 1 5 ．5 染色體區(qū)，我們推測(cè)1 1 p 1 5 ．5 染色體區(qū)與骨肉瘤發(fā)生密切相關(guān)。為了明確位于1 1 p 1 5 區(qū)的這些差異表達(dá)的印記基因在骨肉瘤中的作用及調(diào)控機(jī)制，本研究選擇母本印記的I G F

2、 ．2 基因和父本印記的T s S C 3 基因進(jìn)一步深入研究。I G F 一2 基因，編碼一種絲裂原蛋白肽，參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化等多種生理過程。人I G F ．2 基因包含4 個(gè)不同的啟動(dòng)子( P 1 ．P 4 ) ，呈發(fā)育階段和組織特異性的表達(dá)。在人類上皮性腫瘤和某些肉瘤中，I G F ．2 基因過度表達(dá)，胚胎源性的P 3 和P 4 啟動(dòng)子活性上調(diào)，與印記丟失、差異甲基化區(qū)域和啟動(dòng)子區(qū)域的低甲基化相關(guān)。在骨肉瘤中也有I G F 一

3、2 基因高表達(dá)與P 3 和P 4 啟動(dòng)子特異轉(zhuǎn)錄本表達(dá)上調(diào)相關(guān)的報(bào)道，但誰是骨肉瘤發(fā)生中的優(yōu)勢(shì)啟動(dòng)子，其表達(dá)調(diào)控的機(jī)制如何，目前尚不清楚。T S S C 3 基因，又名口L 基因，是第一個(gè)被報(bào)道的凋亡相關(guān)印記基因，位于1 1 p 1 5抑癌基因區(qū)，推測(cè)其有抑制生長的效應(yīng)。目前僅在W i l m s ’腫瘤、完全性葡萄胎和惡性膠質(zhì)瘤中有表達(dá)缺失的報(bào)道，但在骨肉瘤中T S S C 3 基因的表達(dá)如何，參與印記形成的D N A 甲基化機(jī)制是否

4、與其表達(dá)相關(guān)，目前尚缺乏相關(guān)研究。為此，本實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行：第一部分?jǐn)M通過免疫組化、R T - P C R 技術(shù)檢測(cè)骨肉瘤中I G F ．2 基因及其相關(guān)啟動(dòng)子特異轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)，以明確骨肉瘤中I G F ．2 基因的優(yōu)勢(shì)啟動(dòng)子，并采用R F L P 和B S P方法檢測(cè)I G F ．2 基因的印記狀態(tài)和相關(guān)區(qū)域的甲基化表型，目的在于闡明骨肉瘤特異的I G F ．2 轉(zhuǎn)錄本相關(guān)的調(diào)控機(jī)制。第二部分?jǐn)M采用R P P C R 方法檢測(cè)骨肉瘤組

5、織和骨肉瘤細(xì)胞株中T S S C 3 基因的表達(dá)，并用D N A 甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5 ．A z a —C d R 處理骨肉瘤細(xì)胞，檢測(cè)其對(duì)骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響，分析T S S C 3 基因表達(dá)與啟動(dòng)子甲基化表型的相關(guān)性，接著對(duì)T S S C 3 基因的功能進(jìn)行初步研究，目的在于闡明骨肉瘤中T s S C 3 基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制及可能的抑癌基因作用，為骨肉瘤的表遺傳學(xué)治療提供理論基礎(chǔ)。主要的結(jié)果如下：1 ．免疫組化方法檢測(cè)顯示：骨肉

6、瘤組織中I G F ．2 蛋白表達(dá)的陽性率為8 3 ．3 ％( 2 0 ／2 4 ) ，I G F ．2 蛋白的表達(dá)在骨肉瘤病理組織學(xué)分型、性別和年齡中的差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P > O ．0 5 ) 。2 ．R T - P C R 方法檢測(cè)顯示：2 0 例I G F 一2 陽性的骨肉瘤標(biāo)本中，I G F ．2 基因成人源性的P l 啟動(dòng)子表達(dá)豐度為O ．1 2 ±o ．0 3 ，胚胎源性的P 3 啟動(dòng)子表達(dá)豐度為1