ⅰ.doxycycline誘導細胞凋亡及其機制;ⅱ.gdnf修飾的人羊膜上皮細胞在大鼠mcao模型中的治療作用

1、中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所博士學位論文Ⅰ.Doxycycline誘導細胞凋亡及其機制;Ⅱ.GDNF修飾的人羊膜上皮細胞在大鼠MCAO模型中的治療作用姓名：武家才申請學位級別：博士專業(yè)：細胞生物學指導教師：郭禮和20060601第一部分D o x y c y c l i n e 誘導的細胞凋亡及其機制第一章D o x y c y c l i n e 誘導H e L a 細胞凋亡機制摘要強力霉素( D o x y

2、 c y c l i n e ，D c ) 誘導腫瘤細胞凋亡及其在腫瘤動物模型中的治療作用已有報道，其治療作用主要是通過抑制細胞金屬基質蛋白酶表達及細胞色素C 氧化酶活力來抑制細胞轉移、誘導細胞凋亡，但D c 誘導細胞凋亡的機制還不清楚。本章研究了線粒體，c a l p a i n 和c a s l 娜e 在D c 誘導H e L a 細胞凋亡過程中的作用。通過細胞形態(tài)學及D N A l a d d 盯分析證明D c 能夠誘導H e L

3、 a 細胞發(fā)生顯著凋亡，并且這一過程具有藥物濃度和時間依賴性。廣泛性c 鷸p a S e ( 半胱氨酸天冬氨酸特異蛋白酶) 抑制劑( z V A D —r i n k )及c 硒p a s e ．8 ，．9 特異抑制劑( z I E T D —f m k , z L E H D ．f m k ) 抑制分析表明，D c 誘導的凋亡具有c 船p 嬲e 活力依賴性。W e s t e r n b l o t 檢測到c a S p 船e 一3

4、，．9 ，．8 及c a l p a i n I ( 鈣依賴蛋白酶I ) 發(fā)生了活化，但c 鵲p 嬲e - 2 活化沒有被檢測到。在胞漿蛋白中可以檢測到從線粒體中釋放的細胞色素c ( C y tc ) 和S m a c ，并且這兩種蛋白的釋放不能被z V A D —f m k和z I E T D ．f m k 所抑制。進一步通過使用各種蛋白酶抑制劑，結合W e s t e r n b l o t 和細胞凋亡分析證明，c a s p a

5、s e - 9 可能作為起始c a s p 嬲e 通過線粒體途徑活化，而c 船p a s e - 8 主要通過c a s p 船e ．9 和c a l p a i n 途徑活化。C a s p a s e ．8 和．9 的特異抑制劑對c a s p 嬲e - 3 的活化都有抑制作用，但前者抑制作用更強，這一結果與凋亡抑制分析結果一致。抑制c a s p 髂e 一8活力后檢測細胞凋亡率及c 船p 嬲e ．3 活化，結果證明在D c 誘導的