人羊膜上皮細胞側腦室移植治療腦出血大鼠的實驗研究.pdf

1、目的： 人羊膜上皮細胞(hAECs)具有胚胎干細胞及多能干細胞的特征，羊膜細胞體外誘導后能分化成胚胎發(fā)育的三個胚層細胞：內胚層(肝和胰腺細胞等)中胚層(心肌細胞等)外胚層(神經(jīng)細胞等)。羊膜細胞能分化成各種組織，我們對人羊膜上皮細胞進行體外分離培養(yǎng)，并觀察其生物學特性及在移植到大鼠體內的存活遷移及分化。觀察細胞移植對腦出血大鼠腦水腫及大鼠神經(jīng)功能恢復的影響。 方法： 1、取健康孕婦剖宮產后羊膜，經(jīng)膠原酶和胰蛋白酶

2、消化后，對人羊膜上皮細胞進行分離培養(yǎng)，并對分離的羊膜細胞進行HE染色。 2、依據(jù)大鼠腦圖譜，用Ⅳ型膠原酶立體定向注射制作大鼠尾狀核腦出血模型，對大鼠神經(jīng)功能進行評價。將用Hoechst33258標記的人羊膜上皮細胞移植入腦出血大鼠側腦室，并對大鼠腦組織進行冰凍切片，焦油紫染色，顯微鏡下觀察。 3、大鼠尾狀核腦出血模型建立后24小時，將慢病毒轉染EGFP的羊膜細胞移植入尾狀核出血側側腦室。神經(jīng)功能評價采用Menzies評分

3、法及平衡木測試。隨后處死大鼠取腦，測定大鼠腦水含量，制作冰凍切片，免疫組化染色觀察。 結果： 1、培養(yǎng)的人羊膜上皮細胞貼壁生長，細胞呈圓形，多角形，核較大。 2、大鼠腦出血模型行為學檢測評分明顯低于正常大鼠，有統(tǒng)計學意義，焦油紫染色顯示大鼠出血灶神經(jīng)組織損傷明顯。HAECs側腦室移植后，Hoechst33258標記的人羊膜上皮細胞呈藍色熒光，分布大鼠側腦室內，細胞呈圓形，多角形，與宿主整合良好，無異常增生。

4、 3、大鼠側腦室移植HAEC-EGFP后4周，熒光顯微鏡下可見HAEC-EGFP沿側腦室壁生長，細胞輪廓清晰，呈綠色熒光。Vimentin免疫組化檢測可見部分人羊膜上皮細胞呈陽性表達。大鼠神經(jīng)功能檢測顯示，移植組在移植2天后神經(jīng)功能明顯改善，Menzies評分法及平衡木測試評分均高于對照組，兩組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。移植后第二、三、七天，移植組腦出血大鼠腦水含量測定明顯低于對照組，兩組比較有統(tǒng)計學意義。小膠質細胞免疫組化觀