人羊膜上皮細(xì)胞側(cè)腦室移植治療腦出血大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 人羊膜上皮細(xì)胞(hAECs)具有胚胎干細(xì)胞及多能干細(xì)胞的特征，羊膜細(xì)胞體外誘導(dǎo)后能分化成胚胎發(fā)育的三個(gè)胚層細(xì)胞：內(nèi)胚層(肝和胰腺細(xì)胞等)中胚層(心肌細(xì)胞等)外胚層(神經(jīng)細(xì)胞等)。羊膜細(xì)胞能分化成各種組織，我們對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞進(jìn)行體外分離培養(yǎng)，并觀(guān)察其生物學(xué)特性及在移植到大鼠體內(nèi)的存活遷移及分化。觀(guān)察細(xì)胞移植對(duì)腦出血大鼠腦水腫及大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。 方法： 1、取健康孕婦剖宮產(chǎn)后羊膜，經(jīng)膠原酶和胰蛋白酶

2、消化后，對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，并對(duì)分離的羊膜細(xì)胞進(jìn)行HE染色。 2、依據(jù)大鼠腦圖譜，用Ⅳ型膠原酶立體定向注射制作大鼠尾狀核腦出血模型，對(duì)大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。將用Hoechst33258標(biāo)記的人羊膜上皮細(xì)胞移植入腦出血大鼠側(cè)腦室，并對(duì)大鼠腦組織進(jìn)行冰凍切片，焦油紫染色，顯微鏡下觀(guān)察。 3、大鼠尾狀核腦出血模型建立后24小時(shí)，將慢病毒轉(zhuǎn)染EGFP的羊膜細(xì)胞移植入尾狀核出血側(cè)側(cè)腦室。神經(jīng)功能評(píng)價(jià)采用Menzies評(píng)分

3、法及平衡木測(cè)試。隨后處死大鼠取腦，測(cè)定大鼠腦水含量，制作冰凍切片，免疫組化染色觀(guān)察。 結(jié)果： 1、培養(yǎng)的人羊膜上皮細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞呈圓形，多角形，核較大。 2、大鼠腦出血模型行為學(xué)檢測(cè)評(píng)分明顯低于正常大鼠，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，焦油紫染色顯示大鼠出血灶神經(jīng)組織損傷明顯。HAECs側(cè)腦室移植后，Hoechst33258標(biāo)記的人羊膜上皮細(xì)胞呈藍(lán)色熒光，分布大鼠側(cè)腦室內(nèi)，細(xì)胞呈圓形，多角形，與宿主整合良好，無(wú)異常增生。

4、 3、大鼠側(cè)腦室移植HAEC-EGFP后4周，熒光顯微鏡下可見(jiàn)HAEC-EGFP沿側(cè)腦室壁生長(zhǎng)，細(xì)胞輪廓清晰，呈綠色熒光。Vimentin免疫組化檢測(cè)可見(jiàn)部分人羊膜上皮細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)。大鼠神經(jīng)功能檢測(cè)顯示，移植組在移植2天后神經(jīng)功能明顯改善，Menzies評(píng)分法及平衡木測(cè)試評(píng)分均高于對(duì)照組，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。移植后第二、三、七天，移植組腦出血大鼠腦水含量測(cè)定明顯低于對(duì)照組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。小膠質(zhì)細(xì)胞免疫組化觀(guān)