丙酮酸鹽和尿嘧啶核甙在u937ρ176;細(xì)胞培養(yǎng)中的促分化作用

1、授 予 單位 代 碼學(xué) 號或 申請 號密 級10 4 5 92 0 0 61 2 0 4 4 1 0 0 2 1 4 0 1 2公 開文學(xué) 論 大 位 州 學(xué) 鄭 士碩(科 學(xué) 學(xué) 位 )丙 酮 酸 鹽 和 尿 哦 陡 核 試 在 U 937· p” 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 中的 促 分 化 作 用院 系 名 稱 : 鄭 州 大 學(xué) 第 一 附 屬 醫(yī) 院學(xué) 科 門 類 : 醫(yī) 學(xué)專 業(yè) 名 稱 : 腫 瘤 學(xué)作 者 姓 名 : 劉

2、界 杉導(dǎo) 師 姓 名 、職 稱 : 索 振 河 教 授 樊 青 霞 教 授二 零 零 九 年 五 月鄭 州 大學(xué) 2以 為屆碩 士學(xué)位 論文 丙酮酸鹽和尿喻呢核貳在 U 937一 Po細(xì)胞培養(yǎng) 中的促分化作用我 們 應(yīng) 用 U 93 7一 p“ 細(xì) 胞研 究 了線粒 體 D NA 的恢 復(fù) ，應(yīng) 用 大 量 實(shí)驗(yàn) 證 明 了U 937-Po 細(xì)胞 中線粒 體的完整性 。并運(yùn)用超 微結(jié)構(gòu) 分析 了丙酮酸和尿啼吮在促進(jìn)細(xì) 胞 粘 附 中 的

3、 作 用 。我 們 發(fā) 現(xiàn) U 93 7一 p。 細(xì) 胞 系 在 某 種 程 度 上 可 以恢 復(fù) 功 能 性 線 粒體 以及 完 整 的線 粒 體 D N A ，同時 丙酮 酸和 尿 啥 睫 對 于 這 些 細(xì) 胞 系 具有 促 進(jìn) 分 化 的作 用 。實(shí)驗(yàn) 方 法(- )U 93 7一 p。 細(xì) 胞 對 比體外培養(yǎng) ，細(xì)胞 平 均 分 組 后 用 不 同培養(yǎng) 基 培 養(yǎng) ，倒 置顯微 鏡 下 觀 察 各 組 細(xì) 胞 形 態(tài) 及 生長

4、速 度 的變 化 ?？?用 電鏡 對 不 同實(shí) 驗(yàn) 組 的細(xì) 胞進(jìn) 行超 微 結(jié) 構(gòu) 檢 查 。曰 用 P C R 法 檢 測 細(xì) 胞 中的線 粒 體 D N A 。實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果曰 .A 組 在 含 有 丙 酮 酸和 尿 哦 陡 的培 養(yǎng) 基 中培 養(yǎng) 的 u 93 7一 Po細(xì) 胞 生 長 良好 ，大部 分 細(xì) 胞 可 以在 傳 代 后 24 小 時 內(nèi)迅 速 貼 附在 培 養(yǎng) 瓶 壁 上 。 培 養(yǎng) 過 程 中細(xì) 胞 緊 密貼壁

5、，必 須 用 胰 酶 作用 才 能 分 離 并收集 細(xì)胞 。B 組 在 不 含 丙 酮 酸 和 尿 啼 呢 的培 養(yǎng) 基 中培 養(yǎng) 的 細(xì) 胞 則 無 明顯 貼 壁 ，培 養(yǎng) 三 天后 ，仍 僅 有 少 量 的細(xì) 胞 貼 附在 培 養(yǎng) 瓶 壁 上 ，或 全 部 漂 浮 在 培 養(yǎng) 基 里 。培 養(yǎng) 中細(xì) 胞可 形成 球 形 克 隆 ，并 懸 浮 在 培養(yǎng) 基 中或僅 僅 松 散 的覆 蓋 在 培養(yǎng) 瓶 底 ?？?.A 組 貼 壁 細(xì) 胞

6、 體 積 較 B 組懸 浮細(xì) 胞 大 ，細(xì) 胞 內(nèi)含 有 豐 富 的細(xì) 胞 器 ，如線 粒體 ，粗 面 內(nèi)質(zhì) 網(wǎng) ，高 爾 基 復(fù)合 體 ，核 糖 體 ，多 囊 泡 體 (m ult ivesi cu l ar 伙xly )，被覆小 泡 。特 別 是這 些 細(xì) 胞 富含 各 級溶 酶 體 (包 括 初 級 溶 酶 體 和 次級 溶 酶 體 )，并 且 具有 長 的細(xì) 胞 突 起 和 彎 曲 內(nèi)陷 的核膜 ， 這 些 都 表 明 了其 具

7、 有 分 化 的 巨噬 細(xì) 胞 的特 征 。B 組 細(xì) 胞 體 積 較 小 ，細(xì) 胞 中細(xì)胞 器較 少 ，細(xì) 胞 突 起 短 或 比較 平 滑 。A， B 兩 組 細(xì) 胞 內(nèi)均 可 見 球 形 線 粒 體 ，其 結(jié) 構(gòu) 緊 湊 ，線 粒 體 靖 清 晰 。均 未 見 明顯 線 粒 體 缺 陷 。白 在 線 粒 體 D N A 不 同位 點(diǎn) 上 的 不 同 引 物 對 經(jīng) P C R 反 應(yīng) 檢 測 均 得 到 滿 意 的擴(kuò)增 產(chǎn) 物 ，