松弛素和白藜蘆醇在體外高糖環(huán)境誘導心肌細胞肥大的作用機制研究.pdf

1、目的：探討松弛素和白藜蘆醇對高糖誘導的H9C2心肌細胞肥大的影響及其可能分子機制。
　　方法：⑴將H9C2心肌細胞分為正常糖濃度對照組（NG組）、高糖組（HG組）、松弛素組（HG+RLX組）、松弛素+Notch1拮抗劑組（HG+RLX+DAPT組）。用 CCK8法檢測細胞存活率，AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡率,羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽檢測細胞表面積，DCFH-DA熒光染色法檢測細胞內活性氧（ROS）水平，比色法檢

2、測細胞內超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）水平,實時熒光定量PCR檢測Notch1、hes1、ANP、BNP基因表達情況，Western blot檢測Notch1、hes1、ANP、BNP、MnSOD、cytochrome c和caspase3蛋白表達情況。⑵將H9C2心肌細胞分為正常糖濃度組（NG組）、高糖組（HG組）、白蘆藜醇組（HG+Res組）和白藜蘆醇+DAPT組（HG+Res+DAPT組）。用鬼筆環(huán)肽檢測細胞表面積

3、, DCFH-DA法檢測細胞內活性氧簇（ROS）水平,比色法檢測SOD、MDA水平,實時熒光定量PCR及Western blot檢測Notch1、hes1、ANP、BNP mRNA和蛋白表達。
　　結果：①CCK8和AnnexinV/PI染色結果顯示，與NG組相比，HG組細胞存活率降低，凋亡率升高，而RLX干預后可顯著降低凋亡率，并呈濃度和時間依賴性增加細胞存活率。細胞表面積結果顯示，與NG組相比，HG組心肌細胞表面積增大，而RL

4、X干預后心肌肥大得到明顯改善。酶學檢測結果顯示，與NG組相比，HG組細胞ROS和MDA含量顯著升高，SOD活性顯著降低，而RLX干預后可增加SOD活性，降低ROS和MDA含量。qRT-PCR及Western blot結果顯示，與NG組相比，HG組Notch1、hes1和MnSOD表達下降，ANP、BNP、cytochrome c和caspase3表達增加，RLX干預后可逆轉上訴效應，但上述保護作用可被Notch1拮抗劑消除。②與NG組相

5、比，HG可誘導心肌細胞肥大，ROS和MDA含量增加，SOD活性下降，伴隨ANP和BNP基因及蛋白表達增加，Notch1和hes1表達下降，白藜蘆醇處理后可逆轉心肌細胞肥大，減輕ROS和MDA氧化損傷，增加SOD活性，抑制ANP和BNP表達，增加Notch1及hes1表達。
　　結論：松弛素可能通過活化Notch1信號通路保護高糖誘導的心肌肥大和凋亡，且可能與減少氧化應激損傷有關。此外，白藜蘆醇可能也通過改善氧化應激，活化Notch