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1、 本課題通過(guò)參考當(dāng)前關(guān)于CAT酶的結(jié)構(gòu)和功能研究進(jìn)展,利用基因工程手段對(duì)野生型cat基因進(jìn)行定點(diǎn)突變,使其蛋白產(chǎn)物催化活性喪失而結(jié)合活性基本不變,并構(gòu)建重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌,得到了可高效穩(wěn)定表達(dá)的重組菌株。而且由于表達(dá)出來(lái)的氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶NH2基端帶了可和Ni柱結(jié)合的HisTag序列,簡(jiǎn)化了純化工藝,大大降低了成本。最后,對(duì)酶的“競(jìng)爭(zhēng)性ELISA曲線(xiàn)”進(jìn)行了初步探索,證明突變型氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶應(yīng)用于檢測(cè)氯霉素是可行的,同時(shí)也為構(gòu)建新
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