RET在生長激素型垂體腺瘤的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、垂體腺瘤（pituitary adenoma，PA）是顱內(nèi)最常見的腫瘤之一，發(fā)病率僅次于腦膠質(zhì)細胞瘤和腦膜瘤。而生長激素型垂體腺瘤(Growth hormone-pituitary adenoma，GH-PA)是常見的功能性垂體腺瘤(20％左右)，臨床上常表現(xiàn)為肢端肥大癥，骨骺閉合前起病則表現(xiàn)為巨人癥。目前最為安全有效的治療方法為經(jīng)鼻蝶的垂體瘤切除術(shù)。術(shù)后一周內(nèi)低GH(<2.5ng/ml)與年齡、性別相適的胰島素類生長因子(Insuli

2、nlike growth factor-1，IGF-1)水平預(yù)示臨床緩解，而在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，部分患者有延遲緩解癥狀，即未達到即刻緩解之標(biāo)準(zhǔn)但激素水平緩慢下降至正常，現(xiàn)有實驗室指標(biāo)如GH、IGF-1等不足以準(zhǔn)確提示遠期預(yù)后和延遲緩解，所以GH-PA的術(shù)后療效預(yù)測仍然有待深入研究。RET(rearranged during transfection)是一種跨膜酪氨酸激酶受體，目前已經(jīng)證實與多種內(nèi)分泌腫瘤的轉(zhuǎn)歸和預(yù)后有密切聯(lián)系。到目前為止，

3、尚未有報道RET在正常人垂體中的表達情況，而其在垂體腺瘤中表達也需要進一步的研究，本研究擬從臨床和基礎(chǔ)兩方面闡述RET在垂體腺瘤中的相關(guān)性，一則通過免疫組化和疾病隨訪觀察 RET在垂體腺瘤的轉(zhuǎn)歸和預(yù)后的預(yù)測作用，一方面從動物模型（垂體腺瘤模型以及癲癇模型）水平觀察調(diào)控RET/GDNF信號通路對疾病的影響。
　　實驗一、RET的表達與生長激素型垂體腺瘤患者生長激素水平的相關(guān)性分析
　　目的:探討RET的表達和單純生長激素型垂體

4、腺瘤(GH-PA)術(shù)后緩解情況、術(shù)后GH水平的相關(guān)性。
　　方法:收集并隨訪西京醫(yī)院2010-2013年收治的單純 GH-PA經(jīng)鼻蝶內(nèi)鏡手術(shù)患者20例(不緩解10例、即刻緩解6例、延遲緩解4例)，監(jiān)測術(shù)前、術(shù)后1周、3個月和1年血清GH水平，并取病理標(biāo)本采用免疫組化檢測RET的表達。
　　結(jié)果:延遲緩解患者 RET表達水平相比即刻緩解、不緩解患者較低(P＜0.05)；RET的表達水平與GH激素水平（術(shù)前、術(shù)后3個月、術(shù)后1年

5、）無顯著相關(guān)性(P＞0.05)，但與術(shù)后GH激素水平的升高(GH1年-GH1周)呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論: RET表達水平一定程度上能夠預(yù)測患者的延遲緩解，且與術(shù)后GH激素水平升高正相關(guān)。
　　實驗二、調(diào)控RET依賴性GDNF信號通路對動物模型的影響
　　目的：探究立體定向注射anti-GDNF抗體對匹魯卡品誘導(dǎo)的大鼠癲癇模型和苯甲酸雌二醇誘導(dǎo)垂體腺瘤模型的影響。
　　方法：選擇成年SD大鼠雌雄各60

6、只，雄性60只進入癲癇模型中分為：假手術(shù)組1(sham1組，n=20)、模型組1(model1，n=20)，GDNF抑制劑組1(anti-GDNF1組，n=20)；雌性60只進入垂體瘤模型中同樣分為：假手術(shù)組2(sham2組，n=20)、模型組2(model2，n=20)，GDNF抑制劑組2(anti-GDNF2組，n=20)。使用氯化鋰-匹魯卡品腹腔注射誘導(dǎo)癲癇模型（model1），使用苯甲酸雌二醇誘導(dǎo)垂體腺瘤（model2），各個s

7、ham組只給予等計量的生理鹽水，各個anti-GDNF組在造模前2h給予大鼠雙側(cè)海馬CA1區(qū)（model1組）或者垂體部位（model2組）立體定向注射anti-GDNF抗體。
　　從而進行以下探究：
　　1.model1大鼠造模后1、3、7d觀察癲癇的發(fā)作頻率，7d后采用腦電圖監(jiān)測(EEG)測定腦電波的變化情況，model2組在7d觀察垂體前后，上下徑和重量；
　　2.在通過免疫組化方法測定海馬CA1區(qū)域（model

8、1）和垂體（model2）神經(jīng)元數(shù)量變化(NeuN表達水平)；
　　3.造模后1d時使用western blot方法測定海馬CA1區(qū)域（model1）和垂體區(qū)域（model2）GDNF、RET和P53蛋白的表達。
　　結(jié)果：1.Model1組大鼠棘-慢波數(shù)量明顯高于Sham1組，anti-GDNF1組以上指標(biāo)較model1組顯著減少(P＜0.05), anti-GDNF2組的垂體大小相比model2組小(P＜0.05)；Mo

9、del1組神經(jīng)元大量凋亡，但anti-GDNF組凋亡較model1組顯著減少(P＜0.05)，于此相同model2組神經(jīng)元凋亡數(shù)量較anti-GDNF2多；兩組模型中，GDNF、RET的表達均有不同程度的上調(diào)，但P53水平有所下降，而anti-GDNF1組大鼠海馬CA1區(qū)相較model1組的GDNF、RET表達較model組明顯下調(diào)，P53表達水平顯著上降(P＜0.05)，model2組也有相同改變。
　　結(jié)論：調(diào)控RET依賴性G