三種中藥提取多糖及其復(fù)合多糖抗氧化作用研究.pdf

1、多糖不僅是構(gòu)成生物有機體的基礎(chǔ)物質(zhì)之一，而且在許多基本生命過程中發(fā)揮極為重要的作用。中藥多糖是中藥活性成分中重要的組成部分，目前研究發(fā)現(xiàn)其具有免疫增強、抗腫瘤抗病毒及其他功能，抗氧化作用是其發(fā)揮前述功能的主要原因之一。中藥的使用一般通過復(fù)方組合獲得良好的治療效果，其中來源于不同中藥的多糖具有不同的抗氧化作用，為了更好的研究中藥多糖的相互作用，我們將不同的中藥多糖按照一定比例組成復(fù)合多糖（PM），研究PM進入機體后的的抗氧化作用及其可能的

2、機制，為中藥復(fù)方多糖的開發(fā)利用提供一定的依據(jù)。
　　本研究從枸杞、黃芪、紅棗三種中藥中提取多糖成分，對枸杞多糖（LBP）、黃芪多糖（APS）、紅棗多糖（JPS）多糖按照一定比例組成的復(fù)合多糖進行相關(guān)抗氧化活性研究。通過體外清除自由基、體外細胞抗氧化活性實驗，比較和評估了單味多糖與復(fù)合多糖的抗氧化活性差異，并通過氧化損傷小鼠模型檢測多糖的體內(nèi)抗氧化作用，試圖研究多糖的體外和體內(nèi)的抗氧化活性及其可能的機制。本課題主要研究方法及結(jié)果如下

3、：
　　1.通過水提醇沉法，Sevag法除蛋白雜質(zhì)，透析法除去小分子雜質(zhì)，冷凍干燥后得到枸杞多糖、黃芪多糖、紅棗多糖三種中藥多糖。多糖樣品采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化單糖，進行液相色譜鑒定。實驗結(jié)果顯示，枸杞多糖、黃芪多糖、紅棗多糖得率分別為1.5％、1.3%和1.1%；苯酚硫酸法檢測總糖含量分別為38.5%、28.4%和43.3%；通過液相色譜法對三種多糖的單糖組成進行分析，表明枸杞多糖、黃芪多糖、紅棗多

4、糖均主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、巖藻糖7種單糖和半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等組成。
　　2.將枸杞多糖、黃芪多糖、紅棗多糖及其復(fù)合多糖進行DPPH自由基清除、超氧陰離子自由基清除、羥基自由基清除和還原能力等抗氧化檢測，建立過氧化氫氧化損傷的LO2(人正常肝細胞)和HepG2(人肝癌細胞)模型，細胞與多糖共孵育后使用MTT法檢測細胞活力。過氧化氫氧化損傷LO2和HepG2細胞加多糖處理后分別檢測其丙二醛（MDA

5、）水平，超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）活性。實驗的結(jié)果顯示，枸杞多糖、黃芪多糖、紅棗多糖及其復(fù)合多糖均具有良好的體外抗氧化活性，但弱于同濃度下的抗壞血酸（VC)。建立5μmol/L和50μmol/L H2O2 LO2細胞和HepG2細胞損傷模型；在氧化損傷的細胞模型中，80μg/mL和160μg/mL復(fù)合多糖分別作用兩種細胞模型時，LO2細胞和HepG2細胞存活率最高，說明低濃度的復(fù)合多糖對細胞有較好抗氧化作

6、用；三種多糖及其復(fù)合多糖均能顯著降低細胞MDA水平，SOD和GSH-Px活性明顯升高，說明均具有一定的抗氧化作用，其中復(fù)合多糖在較低濃度時對氧化損傷的細胞有較好的保護作用。
　　3.采用四氯化碳進行小鼠急性肝損傷造模，研究多糖在抗氧化和保護肝臟的功效。對血清白蛋白（Alb）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性進行測定。從MDA含量水平、SOD、GSH-Px和CAT（過氧化氫酶）等相關(guān)酶活力探討多糖抗氧化發(fā)揮肝保護的相關(guān)

7、機制。結(jié)果顯示，復(fù)合多糖低劑量組（PML）、復(fù)合多糖中劑量組（PMM）、復(fù)合多糖高劑量組（PMH）和枸杞多糖、黃芪多糖、紅棗多糖給藥組不同程度的升高肝損傷小鼠血清中的Alb含量，不同程度的降低肝損傷小鼠血清中的ALT和AST活性；能顯著降低MDA含量，提高SOD、GSH-Px和CAT酶活性，其中復(fù)合多糖低劑量組效果最明顯，說明多糖組可能是通過提高體內(nèi)抗氧化酶防御體系，減少自由基的過度累積，從而發(fā)揮抗氧化作用，較低劑量復(fù)合多糖即顯示了良好