大棗中環(huán)磷酸腺苷的提取和精制.pdf

1、本課題研究了HPLC法直接測(cè)定大棗提取液中cAMP含量的方法。采用氯化鋇溶液除去多糖、果膠等大分子對(duì)色譜柱的影響，確定了HPLC法直接測(cè)定提取液中cAMP含量的色譜條件：色譜柱Shim-Pack VP-ODS，流動(dòng)相為甲醇-0.1mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(30：70，V/V)，流速0.6mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)258nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量20μL。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度及樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣的峰面積比值來(lái)計(jì)算樣品中cAMP的濃度。 探論了從

2、大棗中提取cAMP的方法及工藝條件，確定提取方法為熱水浸提法，通過(guò)正交試驗(yàn)得出最佳的提取條件為：料液比1:10，提取溫度100℃，提取時(shí)間15min，提取級(jí)數(shù)為兩級(jí)，cAMP提取率為153.5 μg/g。高壓液相色譜法測(cè)定提取液中cAMP的濃度為11.3-14.5：mg/L。提取液采用硅藻土粗土細(xì)土(1:1)混合助濾澄清法除去提取液中的雜質(zhì)，確定添加量為1﹪，提取液在625nm下透光度為71.5﹪，cAMP回收率為93.3﹪。

3、對(duì)提取液中cAMP的進(jìn)一步分離進(jìn)行了研究。D293大孔陰離子交換樹(shù)脂分離cAMP效果最好。操作參數(shù)為：分離柱的徑高比為1:10，預(yù)處理樹(shù)脂所帶的可交換離子為氯型，提取液調(diào)pH6.0直接上柱，上樣流速為1.5mL/min，洗脫液選擇(0.4-0.6)M NH<,4>C0-0.1M HCI，洗脫流速為0.7mL/min梯度洗脫，樹(shù)脂的工作交換容量為0.72mmol/mL。洗脫液中cAMP濃度為44.0-60.4mg/L，回收率為87.6﹪-

4、90.5﹪，純度12.2﹪-15.5﹪，顏色為褐色。 比較了各種脫色劑對(duì)D293洗脫液的脫色效果。實(shí)驗(yàn)表明氧化鋁脫色效果最佳，具體操作為：0.6M HC1-Tris緩沖溶液平衡氧化鋁柱，上樣溶液調(diào)pH值7.5，上樣量3mL/g(干)，0.6M HCl-Tris緩沖溶液洗脫，洗脫液中cAMP濃度為63.4-80.4 mg/L，純度42.6-64.7﹪，顏色接近無(wú)色。 確定了提取液中分離cAMP的路線(xiàn)，上兩次D293離子交換