骨保護(hù)素緩釋系統(tǒng)的制備及體外實(shí)驗(yàn).pdf

1、背景與目的:
　　骨量不足一直是制約口腔種植適用性和成功率的重要因素。隨著破骨細(xì)胞骨吸收機(jī)制相關(guān)研究的不斷深入，抑制破骨細(xì)胞分化形成的骨代謝平衡調(diào)控可能為骨量不足問(wèn)題的解決提供了一種可行方案。目前研究顯示，骨保護(hù)素/核因子-κB受體活化因子配體/核因子-κB受體活化因子（OPG/RANKL/RANK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在破骨細(xì)胞的激活過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，OPG可以與 RANKL競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，阻斷其與破骨細(xì)胞前體、成熟破骨細(xì)胞表面的RANK

2、受體結(jié)合，從而抑制破骨細(xì)胞的分化形成并加快其凋亡。OPG在預(yù)防口腔正畸效果反彈、治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松、體外RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)培養(yǎng)等方面的研究也確認(rèn)了其抑制破骨細(xì)胞分化形成、減少骨量丟失的作用。由于OPG全身給藥可能引發(fā)心血管、骨硬化癥等系統(tǒng)并發(fā)癥，局部直接用藥又容易藥物流失，目前有學(xué)者提出OPG局部緩釋給藥的用藥途徑以提高其利用率，降低用藥風(fēng)險(xiǎn)。PLGA作為最常用的生物降解型材料，以其為載體構(gòu)建的藥物緩釋給藥系統(tǒng)具有良好的生物相容

3、性。本課題擬通過(guò)PLGA包裹rhOPG構(gòu)建微球緩釋系統(tǒng)，對(duì)比分析傳統(tǒng)和改良球/液分離方法所得緩釋微球在形態(tài)結(jié)構(gòu)、載釋藥特性方面的差異；通過(guò)體外破骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)，驗(yàn)證 rhOPG/PLGA微球緩釋系統(tǒng)的生物安全性、生物有效性，為下一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供支持。
　　方法:
　　1、復(fù)乳溶劑揮發(fā)法配合球/液傳統(tǒng)分離法和改良分離法制備空白PLGA微球和 rhOPG-PLGA微球，并通過(guò)激光粒徑分析儀、光學(xué)和電子顯微鏡、rhOPG-ELI

4、SA檢測(cè)對(duì)比分析微球粒徑、形態(tài)、載藥率、包封率以及釋藥特性。
　　2、處死4周齡SD大鼠，分離、提純脛、股骨全骨髓細(xì)胞，隨機(jī)設(shè)置空白PLGA組、rhOPG/PLGA組和對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)因素處理，倒置顯微鏡下觀察及HE染色、TRAP染色分析細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞類型和數(shù)量，SPSS21.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1、傳統(tǒng)分離組：空白 PLGA微球粒徑(152±13)um，rhOPG-PLGA微球粒徑(151±

5、21)um，微球形態(tài)不規(guī)整，有粘連，空白PLGA微球鏡下見(jiàn)中央透光或折光圓形亮區(qū)；rhOPG載藥率5.25*10-7，包封率62.49*10-2，1d突釋率為27.25*10-2，28d累計(jì)釋藥89.91*10-2。
　　2、改良分離組：空白 PLGA微球粒徑(142±19)um，rhOPG-PLGA微球粒徑(157±16)um，形態(tài)圓整，無(wú)粘連，微球表面微孔均勻；rhOPG載藥率7.69*10-7，包封率51.72*10-2，1

6、d突釋率為37.96*10-2，28d累計(jì)釋藥98.27*10-2。
　　3、細(xì)胞培養(yǎng)：空白PLGA組和對(duì)照組可見(jiàn)TRAP陽(yáng)性的破骨細(xì)胞或破骨樣細(xì)胞，胞漿紅染、有大小不等的空泡，胞膜邊緣不規(guī)則、有偽足樣突起。rhOPG-PLGA組觀察到相對(duì)較多單核細(xì)胞生成，TRAP陽(yáng)性細(xì)胞較少或者無(wú)。
　　4、TRAP陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)：空白PLGA組和對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；rhOPG-PLGA組與其余兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜