降解黃曲霉毒素B1枯草芽孢桿菌的篩選及其功能研究.pdf

1、黃曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是一類由黃曲霉、寄生曲霉等真菌分泌的代謝產(chǎn)物，普遍存在于多種糧食作物和飼料中，有很高的致畸、致癌和致突變作用，不僅危害人類和動(dòng)物的健康，而且對(duì)經(jīng)濟(jì)造成重大影響。本研究旨在分離篩選出能高效降解黃曲霉毒素B1（AFB1）的目的菌株，并對(duì)2株篩選菌的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，之后研究2株菌配合對(duì)AFB1的降解效果。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　（1）降解黃曲霉毒素B1的菌株的篩選：本試驗(yàn)以香豆素為唯一的碳源和能

2、源從土壤、酸奶、雞腸內(nèi)容物、益生菌產(chǎn)品及實(shí)驗(yàn)室保存的菌種中進(jìn)行目的菌株的初步篩選，共獲得18株能在香豆素平板上良好生長(zhǎng)的菌株。其中3株從土壤中分離；3株來源于發(fā)酵的酸奶制品；2株從動(dòng)物糞便得到；3株從益生菌產(chǎn)品分離獲得；7株取自于實(shí)驗(yàn)室保存菌株。然后以菌株對(duì)AFB1的降解率作為篩選指標(biāo)，篩選出8株降解效果較好的菌株，最終選擇2株降解率在80％以上的菌株為目的菌株命名為K-3、K-TM，兩株菌對(duì)黃曲霉毒素B1的降解率分別為83.87%、8

3、0.25%。
　?。?）目的菌株K-3、K-TM細(xì)菌分類學(xué)鑒定，根據(jù)其形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性和16S rRNA序列分析，鑒定目的菌株K-3、K-TM均為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。
　?。?）以對(duì)黃曲霉毒素B1降解率為依據(jù)，優(yōu)化目的菌株培養(yǎng)條件，最佳培養(yǎng)條件為：菌株K-3的裝液量為50mL/250mL、溫度37℃、4%接種量、初始pH7.0、發(fā)酵周期48h，在此前提下150r/min振蕩培養(yǎng)，對(duì)AF

4、B1降解率達(dá)到88.07%（P＜0.05）；菌株K-TM的裝液量為50mL/250mL、溫度37℃、6%接種量、初始pH7.0、發(fā)酵周期60h，在此前提下150r/min振蕩培養(yǎng)，對(duì)AFB1降解率達(dá)到84.81%（P＜0.05）。在最佳培養(yǎng)條件基礎(chǔ)上培養(yǎng)好目的菌株K-3、K-TM并混合，以對(duì)黃曲霉毒素B1降解率為依據(jù)，對(duì)黃曲霉毒素B1降解率最高的組合是K-3、K-TM按1:2的比例組合，對(duì)黃曲霉毒素B1降解率達(dá)到88.43%。本研究為益