姜黃素衍生物C66對(duì)TGF-β刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞增殖和活化的研究.pdf

1、目的：
　　肝纖維化是肝臟在多種刺激因素下進(jìn)行自我損傷修復(fù)的一種可逆性病理過程，是肝硬化和肝癌等嚴(yán)重肝臟疾病的前期階段。肝纖維化大多是由慢性肝損傷因子如病毒感染、酒精等持續(xù)損害遷延形成。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs）的活化被公認(rèn)為肝纖維化的始動(dòng)環(huán)節(jié)。因此，對(duì)肝星狀細(xì)胞活化與肝纖維化進(jìn)展之間關(guān)系的研究從未停止過。詳盡了解肝星狀細(xì)胞在肝纖維發(fā)生中的作用機(jī)制，可發(fā)掘肝纖維化治療的新分子靶標(biāo)，為臨床上

2、治療肝纖維化提供更為科學(xué)有效的理論指導(dǎo)。中藥藥物姜黃素在體內(nèi)和體外均凸顯出了顯著的抗炎、抗增殖特性，但由于其具有代謝快，生物利用度低等缺點(diǎn)，而限制住了其臨床應(yīng)用。我校藥學(xué)院通過對(duì)姜黃素的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改良，人工合成了一系列的姜黃素衍生物。其中，保留了姜黃素單羥基結(jié)構(gòu)的姜黃素衍生物C66在小鼠體內(nèi)表現(xiàn)出了良好的抗炎、抗纖維化特性，具有廣闊的應(yīng)用前景。TGF-β是膠原和其他基質(zhì)合成的最有效的刺激物，是肝纖維化的強(qiáng)效刺激因子之一。由于肝纖維化進(jìn)展和

3、 HSC的活化水平密切相關(guān)，我們?cè)隗w外研究 C66對(duì)HSC增殖和活化的影響。通過對(duì)TGF-β刺激的HSC進(jìn)行不同處理，并檢測纖維化相關(guān)指標(biāo)α-平滑肌動(dòng)蛋白、I型膠原表達(dá)的變化，及其可能作用分子靶標(biāo)大麻素受體1（cannabinoid receptor1，CB1）表達(dá)的改變，并探究該過程中相關(guān)的分子機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞，分為對(duì)照組、TGF-β干預(yù)組、TGF-β+ C66不同濃度組，CCK8檢測其吸光

4、度，選取最佳C66作用濃度及時(shí)間。以上述最佳C66濃度及作用時(shí)間，處理HSC-T6細(xì)胞，分為對(duì)照組、TGF-β干預(yù)組、TGF-β+CB1拮抗劑組、TGF-β+C66干預(yù)組、TGF-β+CB1拮抗劑+C66聯(lián)合干預(yù)組，以WB、PCR檢測CB1、α-SMA、I型膠原mRNA及蛋白的表達(dá)情況，WB方法檢測p-JNK、JNK表達(dá)水平。多樣本均數(shù)方差齊性者采用 LSD法進(jìn)行兩兩比較，方差不齊者用Dunnett T3檢驗(yàn)比較，組間比較采用單因素方差

5、分析。
　　結(jié)果：
　　與單獨(dú)TGF-β干預(yù)組相比，C66抑制HSC-T6細(xì)胞增殖，在一定濃度范圍內(nèi)其抑制效果呈現(xiàn)劑量、時(shí)間依賴性，以10μM C66孵育48h對(duì)HSC-T6細(xì)胞增殖的抑制作用最明顯（P＜0.05）。與單獨(dú)TGF-β干預(yù)組相比，TGF-β+CB1拮抗劑干預(yù)組、TGF-β+C66干預(yù)組的CB1、α-SMA、I型膠原的蛋白表達(dá)呈現(xiàn)下降（P＜0.05），mRNA的表達(dá)也呈下調(diào)（P＜0.05）。與TGF-β+C66或

6、CB1拮抗劑組相比， TGF-β+C66+CB1拮抗劑聯(lián)合應(yīng)用組的CB1、α-SMA、I型膠原的蛋白、mRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。與TGF-β+C66或CB1拮抗劑組相比，JNK磷酸化水平在TGF-β+C66+CB1拮抗劑聯(lián)合應(yīng)用組明顯下降（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　C66和CB1拮抗劑均能有效抑制HSC-T6細(xì)胞的增殖及膠原合成，兩者聯(lián)合應(yīng)用效果更明顯，該過程可能涉及JNK磷酸化水平的