食品和保健品中水溶性維生素的檢測方法及應(yīng)用研究.pdf

1、目的: 建立一種簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的高效液相色譜測定食品中還原型VC與總VC的新方法，應(yīng)用該定性、定量方法測定常見富含VC的飲料、水果、蔬菜等食品中的還原型VC與總VC的含量；考察VC的穩(wěn)定性；提醒人們在日常生活中合理食用富含VC食品，為科學(xué)飲食提供依據(jù)。在此方法基礎(chǔ)上，建立以水.甲醇為流動相的梯度洗脫高效液相色譜同時測定5種常見水溶性維生素。VC、VB1、VB2、VB3和VB6的分析方法，應(yīng)用該方法對多維片和多功能飲料中的

2、5種常見水溶性維生素進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的定性、定量分析。 方法: 1.色譜分析條件1.1 VC的測定反相高效液相色譜法，Waters 515高效液相色譜儀，Waters2996二極管陣列檢測器，Atlantis dC18柱，流動相為0.1％乙酸水溶液。樣品不經(jīng)DTT還原直接測定還原型VC；經(jīng)DTT還原后測定總VC。流速1.0ml/min；檢測波長245 nm，進(jìn)樣量10μL。柱溫：30℃。 2.2水溶性維生素的測定反

3、相高效液相色譜法，島津LC-10AVP高效液相色譜儀，紫外光度檢測器，Waters.Atlantis dC18柱，流動相為0.2％的醋酸水溶液和甲醇；采用線性梯度洗脫；進(jìn)樣量10μL。柱溫：30℃。 2.還原劑DTT還原能力與穩(wěn)定時間用一定濃度的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液，調(diào)節(jié)pH4.5～6。在日光直接照射下使其濃度降至約為原液的10％(當(dāng)天使用)。取上述氧化VC液，與同體積DTT溶液室溫暗處反應(yīng)。以一定的時間間隔取出進(jìn)樣測定。 3.

4、樣品處理 3.1飲料用0.01 mol/L，HCl稀釋至一定濃度，0.45 μm濾膜過濾，4℃放置備用。 3.2水果及蔬菜樣品切碎后，充分混勻，定量稱取一定量樣品，加入適量5 mmol/L KH2PO4溶液，經(jīng)高速分散器勻漿后，定量轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用5 mmol/L KH2PO4水溶液定容，取上層液4000rpm離心，取上清液4℃放置備用。 3.3多維片取多維片10片碾勻，準(zhǔn)確稱取一定量樣品于25mL 容量瓶中，

5、加0.01mol/L HCl 20mL，超聲震蕩30min，定容，混勻靜置片刻，取上清液經(jīng)0.45岬微孔濾膜過濾后進(jìn)樣分析。 4.還原型VC與總VC的測定還原型VC樣品溶液用0.01 mol/L HCl稀釋至一定濃度，0.45 μm濾膜過濾，進(jìn)樣分析。總VC樣品加水稀釋至一定濃度，定容前調(diào)節(jié)pH至4.5～6，0.45 μm濾膜過濾。取濾液與同體積DTT溶液室溫下暗處反應(yīng)20 min，進(jìn)樣分析。 5.方法準(zhǔn)確度與精密度評價

6、5.1校準(zhǔn)曲線分別繪制5種維生素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求其相關(guān)系數(shù)和線性范圍；并將標(biāo)準(zhǔn)系列的最小濃度再逐級稀釋，進(jìn)樣分析，得到各維生素的檢出限。 5.2回收率與精密度取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別做加標(biāo)回收試驗，在一天內(nèi)重復(fù)測定5次，連續(xù)測定5天，計算回收率及其精密度。 6.穩(wěn)定性試驗6.1 4℃放置時間用0.01mol/L HCl為溶劑配制各種水溶性維生素標(biāo)準(zhǔn)使用液，于4℃冰箱中，進(jìn)行24h穩(wěn)定性試驗。 6.2 VC的穩(wěn)定性

7、用DTT還原，研究各種實驗條件下還原型VC被氧化的程度及總VC含量的變化，觀察放置時間、溫度、紫外線照射、不同酸堿度環(huán)境、氧化劑和蔗糖對VC穩(wěn)定性的影響。 結(jié)果： 1.樣品處理及色譜分析條件樣品處理方法簡單；待測組分出峰時間短，5種水溶性維生素均能在17min內(nèi)出峰，且與樣品基質(zhì)在本文色譜條件下分離良好。 2.還原劑DTT還原能力與穩(wěn)定時間DTT的還原能力不受樣品基質(zhì)的影響，在本實驗條件下把AA還原為DHAA的程

8、度均大于95％；且在2h內(nèi)穩(wěn)定。 3.方法準(zhǔn)確度與精密度評價①標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍寬，r值0.9982～0.9998，還原型VC的檢出限為0.05μg/mL，總VC的檢出限為0.1μg/mL；其它4種水溶性維生素的檢出限在0.00μ/mL～0.05μg/mL之間。②樣品加標(biāo)回收率均在90.0％～108.7％之間；③日內(nèi)RSD為1.8％～4.8％，日間RSD為4.6％～8.9％；④DTT還原.高效液相色譜法測定總VC與國家標(biāo)準(zhǔn)方法熒光

9、法比較：經(jīng)配對t檢驗，t=-0.691(P>0.50)，按a=0.05水平，兩種方法差別無統(tǒng)計學(xué)意義。 4.穩(wěn)定性實驗①5種水溶性維生素，在稀鹽酸介質(zhì)中于4℃放置均可穩(wěn)定較長的時間。②VC在加熱溫度不很高時(60℃)，AA主要轉(zhuǎn)化成了DHAA，而在較高的溫度下(100℃)，AA主要水解成了2，3-二酮古樂糖酸。且隨著加熱時間的延長而比例增大；低溫下(4℃)影響較小。紫外線、堿性環(huán)境及氧化劑均影響VC的穩(wěn)定性。 結(jié)論