高產(chǎn)低色素普魯蘭生產(chǎn)菌株的復(fù)合篩選和發(fā)酵條件研究.pdf

1、普魯蘭是由出芽短梗霉在發(fā)酵過程中利用糖代謝產(chǎn)生的胞外多糖，其分子為聚麥芽三糖，即由a-1，4糖苷鍵連接三個葡萄糖形成麥芽三糖，再通過a-1，6糖苷鍵將麥芽三糖連接，形成高分子量的中性線性多糖，其a-1，4糖苷鍵與a-1，6糖苷鍵的比例為2∶1。普魯蘭多糖具有極佳的成膜性、可塑性，粘彈性，無色、無味、抗油脂，氣密性強，易生物降解，對人體和環(huán)境無毒害等優(yōu)點。因此，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品、煙草等行業(yè)。 本文首先對出發(fā)菌株普魯蘭

2、GS01進行了初步研究，主要包括菌株形態(tài)特征及生產(chǎn)性能研究，為下一步的誘變育種作好充分的準(zhǔn)備。 采用載玻片培養(yǎng)觀察法對菌株GS01進行形態(tài)觀察：菌株GS01發(fā)酵結(jié)果的研究表明，當(dāng)GS01的發(fā)酵以生產(chǎn)多糖為目的時，其發(fā)酵周期應(yīng)選擇6天，同時取得了GS01菌種的生長曲線。 采用紫外線和亞硝酸對出發(fā)菌株GS01進行誘變和篩選各2輪，獲得變異菌株GS228，多糖產(chǎn)量提高了2倍，而且無色素產(chǎn)生或色素淡化。通過比較菌落特征，變異菌株

3、GS228菌落大小、質(zhì)地和顏色明顯優(yōu)于出發(fā)菌株GS01。誘變菌株GS228的遺傳穩(wěn)定性試驗，連續(xù)培養(yǎng)10代：發(fā)酵液最終顏色為白色，最終pH值為3.4-3.6，發(fā)酵液吸光值為0.185-0.209，多糖產(chǎn)量為30.11-31.09g/L，表明變異菌株GS228是穩(wěn)定的，可應(yīng)用于實際生產(chǎn)中。 對誘變菌株GS228進行研究：先做誘變菌株GS228的發(fā)酵狀態(tài)曲線，對其發(fā)酵特征進行了研究；培養(yǎng)基的營養(yǎng)條件對誘變菌株GS228的影響；誘變菌

4、株GS228的培養(yǎng)條件試驗；誘變菌株GS228的發(fā)酵條件的優(yōu)化；并分別對誘變菌株GS228的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了正交試驗，從中選擇出最佳的條件。 初步優(yōu)化了變異菌株GS228的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，最終確定了最佳發(fā)酵條件為：市售砂糖60 g/L，酵母浸膏粉0.4 g/L，(NH4)2SO40.6 g/L，KH2PO48 g/L，MgSO47H2O 0.2 g/L，NaCL4 g/L：溫度30℃，初始pH值7.0，種齡36 h，裝液