利用滾環(huán)擴增反應檢測汞及單核苷酸多態(tài)性.pdf

1、核酸是重要的生命大分子，核酸的分析在生命科學研究中具有重要的意義。核酸特殊序列及單核苷酸多態(tài)性（SNP）的檢測，在臨床診斷、病理分析等方面都有很重要的作用。汞污染是一個世界性問題，對人類健康造成重要影響。滾環(huán)擴增(RCA)是新近發(fā)展起來的一種恒溫核酸擴增方法。該方法具有簡單、快速、高靈敏度和特異性好的特點，對核酸及單核苷酸多態(tài)性（SNP）檢測具有廣泛的應用前景。本論文主要應用滾環(huán)擴增技術，結合分子熒光檢測開發(fā)了檢測SNP和汞的新方法。<

2、br>　　 1、結合靈敏度高、特異性強的滾環(huán)擴增技術和熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術，建立了一種均相檢測SNP的新方法。設計掛鎖式DNA 探針，其3’,5’端與突變型DNA 完全匹配。
　　 以突變型DNA 為模板使掛鎖式DNA 探針特異性連接成環(huán)，然后以突變型DNA作引物進行RCA反應。同時，在RCA反應過程中，加入熒光標記的dGTP，使其結合到新合成的DNA鏈上，利用陽離子共軛聚合物（CCP）與DNA 之間強烈的靜電作用，在CCP和

3、結合到DNA鏈上的熒光分子之間發(fā)生有效的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）。而野生型DNA 與掛鎖式探針有錯配堿基，不能使其連接成環(huán)，不能形成RCA反應。根據(jù)二者熒光信號的顯著差異可實現(xiàn)突變型DNA高靈敏度和特異性的檢測，可精確測定1％的突變。
　　 2、設計含有9個堿基的環(huán)形DNA 探針，基于汞離子可以特異性連接T-T堿基，即形成T-Hg2+-T 結構，設計一段含有9個T堿基序列的引物，它能與含有多個T堿基的環(huán)形探針在汞離子的作用下