高效液相色譜法測定杜仲中主要成分和食品中大豆異黃酮.pdf

1、高效液相色譜法(HPLC)是在氣相色譜法和經(jīng)典液相色譜法的基礎上發(fā)展起來的新型分析分離技術。鑒于其快速、準確、靈敏、簡便的特點，至今，已在食品工業(yè)、環(huán)境監(jiān)測、生物工程、制藥工業(yè)、石油化工等領域獲得廣泛的應用。本文由緒論和研究報告兩部分組成。緒論部分簡單概述了高效液相色譜法、色譜技術方面的進展、高效液相色譜在杜仲有效成分分析中的應用和大豆異黃酮的研究進展。研究報告部分建立了杜仲中綠原酸和蘆丁HPLC法測定和食品中大豆異黃酮含量的HPLC法

2、測定，包括：HPLC法測定豆奶粉中四種大豆異黃酮含量；不同豆類中四種大豆異黃酮的HPLC法測定；HPLC法測定綠豆芽中四種大豆異黃酮的含量。
　　 ⑴HPLC法測定杜仲中綠原酸和蘆丁。建立HPLC法測定杜仲中綠原酸和蘆丁含量，并對不同產(chǎn)地杜仲中綠原酸和蘆丁含量進行測定。采用phenomenex C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，以甲醇-冰醋酸(pH=3.10)(45∶55)為流動相洗脫，體積流量為0.8 mL/

3、min，紫外檢測波長為327 nm，采用外標法測定不同產(chǎn)地杜仲中綠原酸和蘆丁的含量。綠原酸和蘆丁分別在0.1275～24.0000μg/mL(r=0.9996)、0.1250～25.0000μg/mL(r=0.9996)線性關系良好，平均回收率分別為99.23％和97.13％，RSD分別為1.02％和2.98％。本方法簡便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好，為不同產(chǎn)地杜仲質(zhì)量標準的進一步研究提供了科學依據(jù)。
　　 ⑵HPLC法測定豆奶粉

4、中四種大豆異黃酮含量。本文建立了同時測定豆奶粉中四種大豆異黃酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色譜法，同時對從豆奶粉中提取大豆異黃酮的工藝進行了優(yōu)化。采用日本島津LC-20A高效液相色譜儀進行測定的色譜條件為：色譜柱為phenomenex C18(150mm×4.6 mm，5.0μm)，采用乙腈-0.2％甲酸為流動相進行梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，檢測波長為260 nm。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木

5、素的線性范圍分別是0.74～100.00μg/mL，0.74～200.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，線性關系良好；加樣回收率(n=9)分別為100.01％，100.01％，99.48％，99.91％，方法簡便、靈敏、準確，適用于豆奶粉中這四種大豆異黃酮成分的含量測定和產(chǎn)品質(zhì)量控制。從豆奶粉中提取大豆異黃酮的最佳工藝為：用70％的乙醇在60℃條件下超聲提取40

6、min。
　　 ⑶不同豆類中4種大豆異黃酮的HPLC法測定。建立同時測定豆類中大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素四種大豆異黃酮成分含量的高效液相色譜法，色譜柱為phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)，采用流動相乙腈-0.2％甲酸進行梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，檢測波長為260 nm。探討了提取黑豆中四種大豆異黃酮的最佳條件，結果顯示，70％的乙醇在60℃超聲提取40 min，效果最佳。

7、大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的線性范圍分別是0.74～100.00μg/mL，0.74～400.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，線性關系良好；加樣回收率(n=9)分別為99.81％，99.99％，99.49％，99.89％，本方法簡便、靈敏、準確，適用于豆類中這四種大豆異黃酮成分的含量測定和產(chǎn)品質(zhì)量控制。
　　 ⑷HPLC法測定綠豆芽中四種大豆異

8、黃酮的含量。本文建立了同時測定綠豆芽中四種大豆異酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色譜方法，對從綠豆芽中提取四種大豆異黃酮的工藝進行了優(yōu)化，最佳工藝為：用60％的乙醇在55℃條件下超聲提取60 min，料液比為1:12，同時探究了綠豆發(fā)芽不同天數(shù)四種大豆異黃酮的含量。采用日本島津LC-20A高效液相色譜儀進行測定的色譜條件為：色譜柱為phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)，采用乙腈-

9、0.2％甲酸為流動相進行梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，檢測波長為260 nm。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的線性范圍分別是0.74～100.00μg/mL，0.74～200.00μg/mL，0.167～500.00μg/mL，0.198～160.00μg/mL(r＞0.9996)，線性關系良好；加樣回收率(n=9)分別為99.99％，100.01％，100.07％，99.81％，該方法簡便、靈敏、準確，為日常生活中綠豆芽