中國(guó)被毛孢固體和液體培養(yǎng)中生長(zhǎng)特性的研究.pdf

1、本文綜述了冬蟲夏草和中國(guó)被毛孢的生物學(xué)特性及其研究進(jìn)展,其中重點(diǎn)概述了冬蟲夏草菌無(wú)性型的確證、中國(guó)被毛孢形態(tài)學(xué)和生長(zhǎng)特性、以及菌體活性物質(zhì)的提取和檢測(cè),之后在此基礎(chǔ)之上展開實(shí)驗(yàn)和研究。實(shí)驗(yàn)以中國(guó)被毛孢為研究對(duì)象,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基優(yōu)化實(shí)驗(yàn)后,分別在固體和液體條件下培養(yǎng)中國(guó)被毛孢無(wú)性型,通過(guò)測(cè)定:1)中國(guó)被毛孢液體培養(yǎng)條件下,菌體生物量、多糖、甘露醇、蛋白質(zhì)等有效藥用成分含量以及過(guò)氧化氫酶、幾丁質(zhì)酶、脲酶、蛋白酶等相關(guān)酶活力的動(dòng)態(tài)變化。2)中國(guó)被

2、毛孢固體培養(yǎng)條件下,菌體形態(tài)學(xué)相關(guān)特性(包括菌絲、分生孢子的特征和形成機(jī)制)和菌體生物量、菌體多糖、甘露醇含量的動(dòng)態(tài)變化。取得以下研究結(jié)果:
　　 1.通過(guò)碳源、氮源、添加物的單因子實(shí)驗(yàn)以及L934多因子正交試驗(yàn),優(yōu)化中國(guó)被毛孢培養(yǎng)基成分和配比,結(jié)果表明:中國(guó)被毛孢生長(zhǎng)最佳碳源、氮源、添加物分別為:葡萄糖、水解乳蛋白和酵母粉、鮮牛奶,其最佳配比依次為2％:0.5%:0.1%:20%。
　　 2.液體培養(yǎng)中,通過(guò)檢測(cè)菌體生

3、物量、采用葸酮-硫酸法檢測(cè)菌體多糖含量、高碘酸鈉比色法檢測(cè)菌體甘露醇含量、考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)菌體蛋白質(zhì)含量,結(jié)果表明:菌體生物量在第16d達(dá)到最大,最高得率為2.74mg/mL,菌體多糖、甘露醇、蛋白質(zhì)含量與菌體生物量成正相關(guān),其最大含量分別為4.73%、3.54%、20.99%。不同溫度條件下,18℃菌體生物量和菌體多糖含量要高于同時(shí)間段的其他溫度條件,而甘露醇則是20℃培養(yǎng)條件下含量更高。
　　 3.液體培養(yǎng)條件下,采用高錳酸

4、鉀滴定法檢測(cè)過(guò)氧化氫酶活力、N-乙酰葡萄糖胺比色法檢測(cè)幾丁質(zhì)酶活性、靛酚藍(lán)比色法檢測(cè)脲酶活性、茚三酮比色法檢測(cè)蛋白酶活性,結(jié)果表明:過(guò)氧化氫酶和蛋白酶的活性隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加而逐漸提高;脲酶活性在第4-8d逐漸提高,8d活性達(dá)到最高,之后出現(xiàn)下降;幾丁質(zhì)酶在第8d-20d酶活力逐漸提高。
　　 4.固體培養(yǎng)條件下,通過(guò)光學(xué)顯微鏡記錄觀察菌體結(jié)構(gòu)、特征和生長(zhǎng)方式、菌體無(wú)性孢子(分生孢子)的形成機(jī)制、血球計(jì)數(shù)版統(tǒng)計(jì)分生孢子數(shù)量變化,

5、結(jié)果表明:中國(guó)被毛孢菌絲主要是以出芽生長(zhǎng)的方式繁殖,分生孢子主要是由分生孢子囊縱裂形成對(duì)生分生孢子的方式形成。分生孢子在培養(yǎng)到第20d時(shí)能明顯的檢測(cè)到,其數(shù)量在第30d達(dá)到最大,不同的溫度條件對(duì)分生孢子形成時(shí)間沒(méi)有影響,但是對(duì)分生孢子的數(shù)量有影響,以14℃條件下分生孢子數(shù)量更高。
　　 5.固體培養(yǎng)條件下,菌體生物量、多糖、甘露醇的含量隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)逐漸增高,培養(yǎng)前期(0-20d),其差異不明顯,隨著物質(zhì)的積累,差異逐漸明顯