FoxO1相互作用蛋白FBP1在細胞自噬中的作用及機理的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Forkhead家族蛋白是一類含有一個保守的DNA結合結構域為特征的轉錄調控子家族,存在于所有的真核生物中。在Forkhead轉錄因子家族中,FoxO亞族包括Fox01,Fox03,Fox04和Fox06四個成員。通過酵母雙雜交實驗,我們得到一個新的FoxO結合蛋白,并將其命名為FBPl。在HEK293T細胞內過表達Flag標簽的FoxO蛋白家族成員FoxO1,FoxO3a,FoxO4,然后通過免疫沉淀反應實驗分析,我們發(fā)現FoxO蛋白

2、家族成員分別能免疫沉淀內源性的FBP1蛋白。為了探究FoxO蛋白家族成員FoxO1蛋白與FBP1蛋白之間是否有直接的相互作用,我們將人的FoxO1基因和人的FBP1基因序列分別克隆到pGEX4T-1和pET21b載體上,并進行體外蛋白誘導表達,通過GST-pulldown實驗驗證了FoxO1蛋白與FBP1蛋白之間有直接的相互作用。通過His-pulldown實驗進一步確定了FoxO1蛋白與FBP1蛋白相互作用的結構域位于FoxO1蛋白的

3、DNA結合結構域,即aa150-270。
　　 我們進一步設計如下實驗來探討FoxO1-FBP1復合體的生物學效應。在HCT116細胞中,敲低FoxO1基因并不影響FBP1蛋白的表達,而敲低FBP1基因則導致FoxO1蛋白水平的降低,提示FBP1蛋白有可能影響FoxO1的表達水平。由于FoxO1參與細胞自噬的代謝過程,且FBP1對FoxO1蛋白水平有調節(jié)的作用,這些證據提示FBP1有可能與細胞自噬有關。為了驗證該假設,我們在FB

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