人hNTKL-BP1基因在HCC中的表達及Rbx1相互作用蛋白的篩選研究.pdf

1、1．人hNTKL-BPJ1基因在HCC中的表達肝癌是世界最常見的惡性腫瘤之一，本文主要探討N端激酶結(jié)構(gòu)樣蛋白結(jié)合蛋白基因(hNTKL-BP1)在人類原發(fā)性肝癌及癌旁肝組織中的表達并建立采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RFQ-PCR)技術(shù)研究hNTKL-BP1表達差異的方法。實時熒光定量PCR技術(shù)準(zhǔn)確性好、重現(xiàn)性高，可定量分析基因表達水平，本文采用該技術(shù)的一種稱為2<'-△△Ct>方法的計算方法分析比較該基因在人類肝癌組織和癌旁肝組織中的表

2、達差異。 44例原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)組織樣品的檢測結(jié)果顯示肝癌組織中hNTKZ-BP1基因表達水平顯著高于癌旁肝組織(t=2.69，P<0.01)。結(jié)合臨床病理資料分析，我們發(fā)現(xiàn)在44例肝癌組織與癌旁肝組織hNTKL-BP1基因表達差異和腫瘤大小有一定的相關(guān)性(P=0.028)，腫瘤越大，hNTKL-BP1基因表達上調(diào)越明顯。該研究成功建立RFQ-PCR檢測hNTKL-BP1mRNA含量的方法，具有較好的檢測靈敏度和重復(fù)性，hNTK

3、L-BP1基因可能與肝癌的發(fā)生、發(fā)展有一定相關(guān)性。 2.Rbx1相互作用蛋白篩選研究Rbx1蛋白是泛素連接酶E3復(fù)合物——SCF復(fù)合物的組成成分，能與cullin-1形成異源二聚體從而催化泛素化進程，在蛋白的泛素化過程中發(fā)揮了重要的作用。本研究主要以Rbxl作為酵母雙雜交的誘餌，通過酵母雙雜交篩選，我們得到了三個能夠與Rbx1發(fā)生相互作用的已知蛋白：SERTAD1蛋白、OS9蛋白、HAX1蛋白。生物信息學(xué)預(yù)測HAXl蛋白有PES

4、T結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為是死亡結(jié)構(gòu)域，與泛素化相關(guān)，普遍認(rèn)為HAX1蛋白是個抗凋亡蛋白。因此我們對Rbx1與HAX1相互作用進行了進一步研究， Rbx1與HAX1蛋白相互作用的特異性通過酵母體內(nèi)驗證實驗、體外GST Pull down實驗得到驗證。根據(jù)Rbx1與HAX1相互作用的研究，對它們的生物學(xué)意義進行討論和思考，我們猜測Rbx1可能通過與HAX1相互作用，影響HAX1的泛素化，從而導(dǎo)致其降解，進而促進細(xì)胞凋亡。上述工作對HAX1的