簡介：第一部分瘦素在肝纖維化組織中的表達研究目的探討瘦素在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展中的表達及臨床意義。結(jié)論瘦素的異常表達與肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，提示瘦素參與了肝纖維化的病理過程。第二部分靶向瘦素基因的SIRNAS真核表達質(zhì)粒篩選平臺的建立目的構(gòu)建具有特異性瘦素LEPTIN基因SIRNA功能的表達載體，篩選有效的靶向瘦素基因的SIRNA真核表達質(zhì)粒。結(jié)論本研究構(gòu)建的LEPTINSIRNAS表達載體中SIRNA278、SIRNA108、SIRNA97和SIRNA454有較強的抑制HSC的黏附力。第三部分靶向瘦素基因的SIRNAS對肝星狀細(xì)胞生物學(xué)活性的影響目的研究靶向LEPTIN基因的SIRNAS在大鼠肝星狀細(xì)胞中LEPTIN表達情況及對HSC生物學(xué)特性的影響。結(jié)論靶向LEPTIN基因的SIRNAS通過抑制靶基因及下游基因的表達逆轉(zhuǎn)活化型HSC的生物學(xué)特征，因此為肝纖維化的基因治療提供一種新的方法。第四部分靶向LEPTIN的SIRNAS對瘦素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制等的影響目的檢測靶向LEPTIN的SIRNAS對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白PSTAT3和細(xì)胞因子TGFΒ1的影響，初步探討SIRNAS對LEPTIN的信號傳導(dǎo)機制等的影響。結(jié)論PSTAT3、TGFΒ1參與了LEPTIN在肝纖維化中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；SIRNAS抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)對于肝纖維化的治療有一定的前景。第五部分SIRNA聯(lián)合Α干擾素抗肝纖維化的實驗研究目的實驗研究表明SIRNA對肝星狀細(xì)胞有抑制作用。本實驗擬進一步研究Α干擾素ALPHAINTERFERON，ΑIFN與靶向LEPTIN的SIRNA97單獨及聯(lián)合作用對肝星狀細(xì)胞體外活性的影響。結(jié)論SIRNA97聯(lián)合ΑIFN的體外抗纖維化作用比單獨應(yīng)用ΑIFN和SIRNA97效果好。第六部分奧曲肽對大鼠肝星狀細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)游離鈣及細(xì)胞增殖的影響目的探討在常氧和低氧條件下奧曲肽OCTREOTIDE對大鼠肝星狀細(xì)胞HEPATICSTELLATECELL胞內(nèi)游離鈣CA2I及增殖的調(diào)節(jié)。結(jié)論缺氧可通過第二信使系統(tǒng)促進HSC的增生，而OCTREOTIDE無論常氧還是低氧條件下劑量依賴性抑制HSCS增殖；CAMP、CGMP參與了對HSC的調(diào)節(jié)。

簡介：目的通過觀察胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中磷脂酰肌醇3激酶PI3K抑制劑沃曼青霉素WTMANNIN誘導(dǎo)胰島素抵抗IR后關(guān)鍵信號葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4GLUT、絲裂原激活蛋白激酶MAPK基因表達的調(diào)節(jié)，探討IR信號傳導(dǎo)分子機理；研究胰島素樣生長因子IGFI刺激作用下對豬卵巢胰島素抵抗與正常顆粒細(xì)胞性激素生成及細(xì)胞色素芳香化酶P450AROM、膽固醇側(cè)鏈裂解酶P450SCC和類固醇激素急性調(diào)節(jié)蛋白STARMRNA的影響；中西藥胰島素增敏劑曲格列酮、二甲雙胍和小檗堿、丹參酮對IR的影響。方法對豬卵巢顆粒細(xì)胞進行體外培養(yǎng)，用PI3K抑制劑WTMANNIN誘導(dǎo)IR模型，以氚三標(biāo)記葡萄糖檢測細(xì)胞中的糖元量，葡萄糖氧化酶法檢測細(xì)胞的葡萄糖消耗量，以化學(xué)發(fā)光法測定培養(yǎng)液中雌二醇E、孕酮P、睪酮T的水平，以免疫熒光對GLUT4、MAPK、PPARΓ蛋白定性分析，以WESTERNBLOT對GLUT4、PPARΓ蛋白表達定量分析，以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR對GLUT、MAPK、P450SCC和STARMRNA半定量分析，以實時熒光PCR對P450AROM、PPARΓ定量分析。結(jié)論1WTMANNIN阻斷PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生IR，關(guān)鍵信號GLUT表達下降影響新陳代謝信號通路，產(chǎn)生IR，而MAPKMRNA水平升高，進而影響有絲分裂信號通路，說明卵巢中存在交替的胰島素信號通路。2首次提出應(yīng)用通過PI3K抑制物WTMANNIN誘導(dǎo)胰島素抵抗的造模的方法，引起胰島靶組織對葡萄糖的攝取和利用減少，通過氚三標(biāo)記葡萄糖及葡萄糖氧化酶法得到驗證。3IGF1刺激了顆粒細(xì)胞P450AROM、STAR、P450SCCMRNA的表達，引起雌激素分泌的增加。IR以后IGF1的干預(yù)刺激雄激素的合成和分泌，STAR、P450SCC的表達明顯增加了。4提出IGFI在卵泡發(fā)育中的作用和細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)及卵巢微環(huán)境中激素與局部生長因子之間的相互調(diào)控作用。5丹參酮和小檗堿降糖的作用特點類似曲格列酮和二甲雙胍。6深入到卵巢細(xì)胞內(nèi)分子水平探討IR信號傳導(dǎo)分子機理及中西藥胰島素增敏劑改善IR的分子機制。此研究有助于闡明有關(guān)IR的發(fā)病機制，尤其是其分子靶點及細(xì)胞內(nèi)信號機制及為預(yù)防和控制PCOS，改善IR的必要性提供了證據(jù)，為傳統(tǒng)中藥的臨床應(yīng)用提供了新的思路。

簡介：第一部分牽張力介導(dǎo)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2的表達及其對平滑肌細(xì)胞功能影響的研究血管重構(gòu)被公認(rèn)為高血壓、冠心病等心血管疾病的重要病理特點，它是指血管管腔面積及形態(tài)、管壁結(jié)構(gòu)和成分、血管功能的慢性改變。機械性損傷、炎癥、低氧、血流動力學(xué)異常等多種因素均參與血管重構(gòu)的形成。由于血管一直暴露于血流動力學(xué)的作用中，異常的血液流體力學(xué)在血管重構(gòu)中的作用及其分子機制，受到國內(nèi)外學(xué)者越來越多的關(guān)注。深入研究血管重構(gòu)的分子機制，確定在這一過程中發(fā)揮重要作用的分子和潛在藥物靶點，對于預(yù)防和減少心血管疾病的死亡率具有重大意義。人體血管長期暴露于搏動性血流的沖擊下，主要承受著兩種形式的生物力，一種是平行于血管長軸的剪切力SHEARSTRESS，主要作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞另一種是垂直于血管長軸的牽張力STRETCHSTRESS，可影響血管壁各種細(xì)胞成分，但位于管壁中層的平滑肌細(xì)胞是其主要靶細(xì)胞。兩種生物力對于血管功能的調(diào)節(jié)均具有重要作用。研究認(rèn)為，平滑肌細(xì)胞受到牽張力的刺激時，其胞膜表面的各種受體分子、離子通道等將膜外機械性的刺激信號轉(zhuǎn)化為胞內(nèi)的生物信號，激活一系列胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及轉(zhuǎn)錄因子，通過影響相關(guān)基因的表達調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、分化等生物學(xué)功能。腎素血管緊張素（RAS）系統(tǒng)是影響血管形態(tài)與功能的重要因素。由血管緊張素轉(zhuǎn)化酶ACE催化產(chǎn)生的血管緊張素ⅡANGⅡ是RAS系統(tǒng)的主要效應(yīng)分子，它在心血管重構(gòu)過程中發(fā)揮重要作用。ANGⅡ不僅具有直接刺激平滑肌細(xì)胞增殖、遷移等功能改變的作用，還介導(dǎo)牽張力對平滑肌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響與相應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。在體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中，牽張力刺激能夠誘導(dǎo)心肌細(xì)胞分泌ANGⅡ，而且不依賴于ANGⅡ而上調(diào)腎素、ACE、AT1R、AT2R等基因的表達，而在心肌成纖維細(xì)胞中則沒有上述作用，這說明牽張力本身具有獨立調(diào)控局部RAS系統(tǒng)基因表達的作用，而且具有一定的細(xì)胞特異性。新近的研究也表明是組織局部RAS，而不是循環(huán)RAS和炎癥因子，對高血壓性心血管重構(gòu)起著重要作用。因此，進一步探索血管局部RAS系統(tǒng)在牽張力介導(dǎo)的血管生物學(xué)功能中的作用及其機制具有重要的臨床意義。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2ACE2是一個新發(fā)現(xiàn)的RAS系統(tǒng)成員，對其生物學(xué)功能的研究成為近年來的熱點。研究發(fā)現(xiàn)，ACE2具有降解ANGⅡ生成血管緊張素17ANG17的作用，后者通過其特異的MAS受體，拮抗ACEANGⅡ信號通路的不良生物學(xué)作用，其被認(rèn)為是RAS系統(tǒng)的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，也是參與心血管重構(gòu)的重要分子。此外，如RAS系統(tǒng)其它組分一樣，實驗證實生物力學(xué)因素也可以調(diào)節(jié)ACE2的表達。ACE2在血管內(nèi)皮細(xì)胞及動脈平滑肌細(xì)胞中均有表達，其組織特異性表達及其對關(guān)鍵血管活性肽ANGⅡ獨特的分解能力，提示它在血管局部RAS中扮演重要角色。與RAS系統(tǒng)的ACEANGⅡAT1R軸相比，ACE2與生物力學(xué)的關(guān)系目前還知之甚少。由于ACE2在心血管重構(gòu)中的保護作用及其對心血管細(xì)胞增殖、遷移、膠原代謝等生物學(xué)功能的影響，我們推測其在牽張力調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞功能中發(fā)揮重要作用。基于近年來的研究對ACE2在血管平滑肌細(xì)胞功能中作用的闡述，以及牽張力調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞功能的重要性，我們特提出以下科學(xué)假說1牽張力調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞ACE2的表達，不同強度的牽張力對ACE2表達的影響不同2牽張力影響包括ACE2在內(nèi)的RAS系統(tǒng)各主要成分的表達，ACE2ANG17MAS軸與ACEANGⅡAT1R軸在牽張力作用下，相互對抗、相互影響，參與不同大小牽張力對平滑肌細(xì)胞生物學(xué)作用的影響。研究目的1在體外細(xì)胞研究中，明確牽張力對血管平滑肌細(xì)胞ACE2表達及活性的影響。2明確ACE2在牽張力調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞生物學(xué)功能中的作用。3通過體內(nèi)實驗驗證力學(xué)對血管平滑肌細(xì)胞ACE2表達的影響。研究方法1細(xì)胞培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)人主動脈平滑肌細(xì)胞HASMCS，待細(xì)胞生長融合后，PBS沖洗細(xì)胞兩遍，以去除血清，加025％胰蛋白酶在細(xì)胞培養(yǎng)箱中消化2分鐘，在倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓時，吸出胰蛋白酶，加入新的完全培養(yǎng)基吹打混勻，轉(zhuǎn)入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。2平滑肌細(xì)胞牽張力干預(yù)分組接種平滑肌細(xì)胞至鋪有Ⅰ型膠原的FLEXCELL六孔板中，待細(xì)胞生長至90％融合時，采用無血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞靜止24H，然后更換新的完全培養(yǎng)基，利用FLEXCELL5000TENSION細(xì)胞拉力儀給予細(xì)胞牽張力刺激，具體分組如下1靜止對照組不給予牽張力刺激，其它條件與牽張力干預(yù)組相同210％牽張力組給予最大峰值為10％的周期性牽張力分別刺激細(xì)胞1、3、6、12、24小時，牽張頻率為1HZ315％牽張力組給予最大峰值為15％的周期性牽張力分別刺激細(xì)胞1、3、6、12、24小時，牽張頻率為1HZ在各個時間點，不同強度牽張力干預(yù)平滑肌細(xì)胞結(jié)束后，連同靜止對照組一起收集細(xì)胞分別提取蛋白與總RNA，80℃保存待測血管緊張素ⅡANGⅡ及血管緊張素17含量（ANG17）。3細(xì)胞存活率檢測平滑肌細(xì)胞經(jīng)不同強度牽張力刺激12小時后，胰酶消化的方法收集細(xì)胞，PBS重懸，臺酚藍染色液染色5分鐘，用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，計算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率（細(xì)胞總數(shù)藍色細(xì)胞數(shù)）細(xì)胞總數(shù)100％。4實時熒光定量PCR檢測ACE2、ACE、MASMRNA表達根據(jù)試劑盒說明，用TRIZOL提取入主動脈平滑肌細(xì)胞總RNA，用TAKARA試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄，在BIORAD公司生產(chǎn)的IQ5上進行實時定量PCR。每個樣本重復(fù)測量三次。ACE2擴增引物序列上游5’CATTGGAGCAAGTGTTGGATCTT3’，下游5GAGCTAATGCATGCCATTCTCA3’ACE擴增引物序列上游5GCGGCTCTTCCAGGAGCTGC3’，下游5’CTGCGCCCACATGTTCCCCA3’MAS擴增引物序列上游5’GGCCTCCTCATGGATGGGTCAA3’，下游5’GTGCATTCCCGACTGAGGCGT3’ΒACTIN擴增引物序列，上游5TGACGTGGACATCCGCAAAG3’，下游5’CTGGAAGGTGGACAGCGAGG3。反應(yīng)結(jié)束得到CT值（循環(huán)閾值），用相對定量的方法計算2ΔΔCT，并分析數(shù)據(jù)。ACE2、ACE、MASMRNA表達以管家基因ΒACTIN進行標(biāo)準(zhǔn)化。5WESTERNBLOT收集細(xì)胞后，提取胞漿胞膜總蛋白，加入蛋白上樣緩沖液，在99℃煮沸10分鐘，SDSPAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，脫脂奶封閉，用1TBST洗膜3次。將PVDF膜放入合適比例的一抗中，4℃孵育過夜，洗膜。合適比例的二抗孵育1小時，洗膜，最后采用MILLIPE顯色液進行發(fā)光，柯達膠片顯影完成后觀察結(jié)果。6ACE2活性測定各種條件干預(yù)后收集細(xì)胞，提取胞漿蛋白。采用7MCAYVADAPKDNP作為反應(yīng)底物，ACE及ACE2都能分解這一底物的2，4二硝基苯基部分，而2，4二硝基苯基能夠淬滅7甲氧基香豆素部分的熒光，它的分解造成熒光增強。20ΜG的總蛋白提取物與10ΜMOLL7MCAYVADAPKDNP混合后室溫下孵育，終容積為100ΜL。采用酶標(biāo)儀讀取激發(fā)光320NM及散射光400NM的熒光強度，動態(tài)讀取熒光值4小時。ACE2活性定義為ACE2活性無抑制劑時的熒光強度ACE2抑制劑DX600存在時的熒光強度。每個樣本測量三次，最后數(shù)值采用RFUMGHOUR。7ANG17及ANGⅡ產(chǎn)物測定不同水平牽張力干預(yù)平滑肌細(xì)胞后，收集胞漿蛋白，ELISA法檢測胞漿蛋白中ANG17及ANGⅡ的含量。8細(xì)胞免疫熒光法檢測ACE2的表達HASMCS接種于FLEX5000TENSION6孔板中，至細(xì)胞生長至90％融合時，更換無血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞靜止24小時后，分為兩組，即靜態(tài)組、10％牽張力干預(yù)12小時組。干預(yù)結(jié)束后棄培養(yǎng)液，PBS洗3次，加入免疫染色固定液固定30MIN，PBS沖洗，剪下種有細(xì)胞的膜，采用免疫熒光染色，滴加相應(yīng)抗體血清，再滴加1∶200熒光素標(biāo)記的二抗，設(shè)陰性及空白對照。熒光顯微鏡下觀察、拍片，直觀明確牽張力對平滑肌細(xì)胞中ACE2的表達是否有作用。9細(xì)胞轉(zhuǎn)染利用陽離子脂質(zhì)體，轉(zhuǎn)染不同濃度的ACE2小干擾RNAACE2SIRNA及陰性對照小干擾RNANEGATIVECONTROLSIRNA，ACE2SIRNA序列為FWARD5CCAUCUACAGUACUGGAAADTDT3REVERSE5UUUCCAGUACUGUAGAUGGDTDT3。NEGATIVECONTROLSIRNA序列為FWARD5UUCUCCGAACGUGUCACGUDTDT3REVERSE5ACGUGACACGUUCGGAGAADTDT3，。轉(zhuǎn)染48小時后收集細(xì)胞，提取胞漿總蛋白，WESTERNBLOT測定ACE2蛋白表達以評價干擾效果，選取合適的SIRNA濃度按照合適的SIRNA濃度進行下一步實驗。10ACE2在牽張力調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞生物學(xué)功能中作用的研究1培養(yǎng)HASMCS，給予生理范圍的牽張力10％ELONGATION，1HZ刺激12H。2采用BRDU摻入法、細(xì)胞劃痕技術(shù)，明確牽張力對HASMCS增殖、遷移的影響。3預(yù)先轉(zhuǎn)染ACE2小干擾RNASIRNA及其陰性對照后再給予牽張力干預(yù)，觀察對上述平滑肌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，明確ACE2在牽張力調(diào)節(jié)HASMCS生物學(xué)功能中的作用。11體內(nèi)實驗觀察壓力負(fù)荷改變對血管平滑肌細(xì)胞ACE2表達的影響1動物模型構(gòu)建20只12周齡雄性C57BL6小鼠，分為兩組，手術(shù)組N10，假手術(shù)組N10。手術(shù)組自胸骨上窩結(jié)扎主動脈弓部致其縮窄，假手術(shù)組術(shù)式與手術(shù)組相同，但不做主動脈弓縮窄。并分別于術(shù)后24小時后處死動物留取標(biāo)本。2壓力負(fù)荷改變與主動脈平滑肌細(xì)胞中ACE2表達的關(guān)系應(yīng)用實時定量PCR、WESTERNBLOT技術(shù)分別測定主動脈弓結(jié)扎上、下游血管段ACE2的MRNA和蛋白表達水平免疫組化雙染測定ACE2在血管平滑肌細(xì)胞中的表達。12統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤MEAN±SEM表示，兩兩比較采用T檢驗，多組之間比較采用單因素方差分析，使用SPSS160統(tǒng)計軟件分析，P＜005認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1不同作用時間下，不同水平的牽張力對主動脈平滑肌細(xì)胞ACE2、ACE、MASMRNA表達的影響研究結(jié)果顯示，ACE2與ACE、MAS均為牽張力敏感的RAS基因。與靜態(tài)對照組比較，10％牽張力作用后1小時ACE2、MAS、ACEMRNA水平與靜態(tài)對照組相比未見明顯改變P＞005），作用3H后ACE2MRNA水平比靜態(tài)對照組明顯增高，于6H達峰31FOLD，P＜001，而且增高趨勢保持到24H，MASMRNA水平自3H開始上升，6H達到峰值24FOLD，P＜001，24小時仍比靜態(tài)對照組明顯增高，而ACEMRNA水平在1H、3H時輕度增高但無顯著性意義，在10％牽張力作用12H、24H時ACEMRNA水平較靜態(tài)組明顯降低041FOLD，P＜005與靜態(tài)對照組比較，15％牽張力作用3H后，ACE2、MASMRNA水平比靜態(tài)對照組表達增高分別為18FOLD，165FOLD，P＜001，P＜005，15％牽張力作用12、24小時后，其ACE2、MASMRNA水平比靜態(tài)對照組明顯降低037FOLD，044FOLD，P＜005，而ACEMRNA水平在15％牽張力作用6H顯著增高，12H達峰235FOLD，P＜001，于24H仍較靜態(tài)組明顯增加219FOLD，P＜001將PCR產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示ACE2于108BP、ACE于142BP、MAS于94BP處顯示清晰的條帶。為了觀察RAS系統(tǒng)中兩個主要的酶對相同牽張力的不同反應(yīng)，我們比較了相同牽張力情況下ACE2及ACE的變化情況，結(jié)果表明在10％的牽張力作用下1小時，ACE2比ACE明顯上調(diào)P＜005，而繼續(xù)牽張3H至24H，與ACE的MRNA水平相比，ACE2始終明顯高表達P＜001而15％的牽張力作用1小時、3小時，ACE2與ACE的MRNA表達沒有顯著性差異，繼續(xù)牽張至6小時，ACE的MRNA表達較ACE2明顯上調(diào)P＜005，至12、24小時，ACE的MRNA表達保持顯著上調(diào)P＜001。2WESTERNBLOT結(jié)果WESTERNBLOT結(jié)果顯示，10％牽張力干預(yù)細(xì)胞1、3小時，ACE2蛋白表達未見有明顯改變P＞005，干預(yù)HASMCS6小時后，ACE2蛋白表達較靜態(tài)對照組明顯升高（P＜001），10％牽張力干預(yù)24小時之后，ACE2蛋白表達水平仍然增高P＜001而15％牽張力刺激細(xì)胞3小時后，引起ACE2蛋白表達水平短暫升高P＜001），而在12、24小時，ACE2表達呈明顯下調(diào)趨勢P＜001。3ACE2活性變化10％牽張力分別干預(yù)HASMCS1、3、6小時后，ACE2活性沒有顯著改變12小時后，ACE2活性比靜態(tài)對照組明顯增加并達到峰值P＜001，而且這種增高趨勢持續(xù)到24H15％牽張力分別干預(yù)HASMCS1、3、6小時，對ACE2的活性均沒有顯著影響，干預(yù)12、24小時后，ACE2活性顯著降低P＜001。4牽張力對ANG17及ANGⅡ產(chǎn)生量的影響10％牽張力作用1H、3H、6H后，ANGⅡ、ANG17水平與靜態(tài)對照組相比未見明顯改變P＞00510％牽張力作用12H、24H后，與靜態(tài)對照組相比，ANGⅡ水平明顯降低P＜001，而ANG17水平明顯升高P＜005，P＜001。15％牽張力作用1H、3H后，ANGⅡ、ANG17水平比靜態(tài)對照組無明顯變化，15％牽張力作用6H后，其ANGⅡ水平比靜態(tài)對照組顯著增加P＜005，而ANG17水平較靜態(tài)組無顯著變化P＞005。15％牽張力作用12H、24H后，ANGⅡ水平比靜態(tài)對照組顯著升高P＜005，P＜001，而ANG17水平明顯降低P＜005，P＜001。5ACE2免疫熒光法檢測結(jié)果給予HASMCS10％周期性牽張力干預(yù)12小時，細(xì)胞免疫熒光進一步顯示與靜態(tài)培養(yǎng)相比，生理牽張力顯著上調(diào)ACE2蛋白表達水平。6ACE2在牽張力調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞生物學(xué)功能中的作用1采用BRDU摻入法結(jié)果提示10％牽張力能夠抑制HASMCS的增殖。2細(xì)胞劃痕實驗證明10％牽張力能夠抑制HASMCS的遷移。3轉(zhuǎn)染ACE2SIRNA48小時后ACE2表達水平顯著下調(diào)，與單純牽張力組比較，下調(diào)ACE2的表達能夠部分抵消10％牽張力抑制平滑肌細(xì)胞增殖、遷移的作用。7組織免疫熒光檢測結(jié)果實驗動物共20只，除1只死于手術(shù)前麻醉外，其余全部成活并順利完成實驗。組織免疫熒光結(jié)果顯示與假手術(shù)組相比，ACE2在結(jié)扎近心端的主動脈平滑肌細(xì)胞中表達明顯減低而在結(jié)扎遠(yuǎn)心端的主動脈平滑肌細(xì)胞中表達沒有明顯改變WESTERNBLOT及實時定量PCR結(jié)果亦顯示主動脈弓結(jié)扎近心端ACE2蛋白及MRNA表達水平下調(diào)，而主動脈弓結(jié)扎遠(yuǎn)心端血管段ACE2表達沒有變化。結(jié)論1生理性牽張力能夠持續(xù)上調(diào)平滑肌細(xì)胞中ACE2的表達，而病理性牽張力早期雖上調(diào)ACE2表達，但隨干預(yù)時間延長其表達呈現(xiàn)下調(diào)趨勢。2ACE2參與生理牽張力對平滑肌細(xì)胞增殖、遷移的抑制作用3在主動脈弓結(jié)扎的小鼠中，與假手術(shù)組相比，異常的牽張力增加可以降低血管平滑肌細(xì)胞ACE2的表達。第二部分牽張力調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞ACE2的分子機制研究由于血管一直暴露于血流動力學(xué)的作用下，異常的血液流體力學(xué)可作用于血管壁細(xì)胞導(dǎo)致動脈血管病變的發(fā)生、發(fā)展。我國高血壓患者已高達2億，高血壓病往往伴有周期性機械牽張力的增加，從而引起血管壁平滑肌細(xì)胞的形態(tài)和功能改變，進一步造成血管重構(gòu)，導(dǎo)致高血壓終末器官損害如心、腦血管疾病及高血壓腎病的發(fā)生、發(fā)展位于血管壁中層的平滑肌細(xì)胞的形態(tài)和功能異常在動脈血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。腎素血管緊張素RAS系統(tǒng)與心血管疾病密切相關(guān)，近年來，RAS系統(tǒng)新成員血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2ACE2對血管的保護作用受到了重視，ACE2在高血壓大鼠血管壁中、糖尿病心肌病和腎病以及心肌梗死動物模型中可以改善心臟及血管重構(gòu)。我們實驗室最近的研究證明在動脈粥樣硬化模型中ACE2過表達可延緩斑塊的發(fā)生發(fā)展，具有減少斑塊易損指數(shù)，穩(wěn)定斑塊的作用。機械牽張力可影響平滑肌細(xì)胞ANGⅡ的分泌，但是對于ACE2的作用尚不明了。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)與靜態(tài)對照組比較，生理牽張力10％ELONGATION，1HZ顯著上調(diào)血管平滑肌細(xì)胞ACE2的表達及活性，而過度增強的病理牽張力15％ELONGATION，1HZ卻下調(diào)血管平滑肌細(xì)胞ACE2的表達與活性，此外，我們的前期研究還發(fā)現(xiàn)ACE2參與牽張力對平滑肌細(xì)胞增殖、遷移功能的調(diào)節(jié)作用。這些研究提示機械牽張力可能通過ACE2影響平滑肌細(xì)胞的功能和血管壁的重構(gòu)，但是牽張力調(diào)控ACE2的確切機制尚需進一步的深入研究。近年來關(guān)于牽張力調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞功能的分子機制研究取得了一定進展。盡管迄今尚未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面存在特異的生物力學(xué)信號感受器，但位于胞膜表面的整合素、酪氨酸受體激酶、離子通道、小凹蛋白等結(jié)構(gòu)均可以將胞外的力學(xué)刺激傳導(dǎo)到胞內(nèi)，激活PKC、MAPK、PI3KAKT等多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以及活化AP1、NFΚB、EGR1、SP1等多種轉(zhuǎn)錄因子，最終通過改變細(xì)胞增殖、凋亡、表型分化等相關(guān)基因的表達而影響細(xì)胞功能。近年來，有關(guān)學(xué)者利用病毒載體或人工重組合成ACE2，在動物水平充分證明了ACE2的心血管保護作用，在體外水平上驗證了其對各種細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。然而，各種病理生理刺激調(diào)控ACE2表達的分子機制目前還知之甚少。盡管有研究發(fā)現(xiàn)在體外培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞中ANGⅡ可以通過激活ERK12信號通路抑制ACE2表達，但另一項研究卻發(fā)現(xiàn)在肝星狀細(xì)胞中，ANGⅡ上調(diào)ACE2的表達此外，研究表明過表達ACE2同樣可以抑制ACE、AT1R的表達，及ANGⅡ的分泌。以上充分說明了ACE2表達調(diào)控與RAS系統(tǒng)各組分之間關(guān)系的復(fù)雜性。既往有研究表明，高糖可以下調(diào)PKCΒⅡ的表達，后者可以下調(diào)SMCS中ACE2的表達及ANG17的生成牽張力可以激活MAPK、AKT、PKC信號通路，并活化AP1、NFΚB、SP1等轉(zhuǎn)錄因子，而ACE2啟動子序列中含有多個AP1、SP1結(jié)合位點。但是牽張力如何影響ACE2表達的機制目前尚未見文獻報道。目前在心血管領(lǐng)域，關(guān)于ACE2的研究大多數(shù)集中在對其下游功能的研究上，而對其自身表達調(diào)控知之甚少，牽張力通過什么信號通路調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞上ACE2的表達AP1、NFΚB是否參與牽張力調(diào)節(jié)ACE2表達這些問題都有待實驗進一步證實。本研究擬在前期研究的基礎(chǔ)上，深入研究生理性周期牽張力10％ELONGATION，1HZ調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞ACE2表達的分子機制，該研究將對動脈血管疾病的發(fā)生機制提供新的思路，對進一步理解RAS系統(tǒng)在維持血管功能與血管重塑中的作用與機制，尋找干預(yù)血管重構(gòu)相關(guān)疾病的新靶點，具有重要的現(xiàn)實意義。研究目的1明確生理牽張力對ACE2啟動子活性及MRNA穩(wěn)定性的影響2確定生理牽張力調(diào)節(jié)人平滑肌細(xì)胞ACE2表達的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子3明確生理牽張力調(diào)節(jié)人平滑肌細(xì)胞ACE2表達的主要信號通路。研究方法1人主動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)及牽張力干預(yù)前期實驗購得人主動脈平滑肌細(xì)胞株HASMCSCIENCELL，采用SCIENCELL平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基SMCGS、2％FBS、1％PENICILLINSTREPTOMYCIN培養(yǎng)細(xì)胞，47代細(xì)胞用于實驗。接種平滑肌細(xì)胞HASMCS至鋪有Ⅰ型膠原的FLEXCELL六孔板中（105個細(xì)胞孔），待細(xì)胞生長達90％融合時，無血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)24小時，更換新的完全培養(yǎng)基，使用FLEXCELL5000TENSION細(xì)胞拉力儀給予細(xì)胞牽張力10％ELONGATION，1HZ刺激。2細(xì)胞牽張力干預(yù)分組21、牽張力對ACE2MRNA穩(wěn)定性的影響1靜態(tài)對照組靜態(tài)培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞，不給予任何通路抑制劑干預(yù)。2牽張力干預(yù)組給予HASMCS牽張力10％ELONGATION，1HZ刺激12小時。牽張力刺激12小時后，與靜止對照組一起，添加放線菌素D5UGML至細(xì)胞培養(yǎng)上清中，以抑制新的轉(zhuǎn)錄，分別用放線菌素D干預(yù)0、6、12小時，利用TRIZOL提取細(xì)胞總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為CDNA，利用實時熒光定量PCR檢測MRNA的表達，結(jié)果以不同時間點的MRNA水平與加入放線菌素D0小時的MRNA的比值來表示。觀察與靜態(tài)對照組相比較，生理牽張力是否增加平滑肌細(xì)胞ACE2MRNA的穩(wěn)定性。22、牽張力對ACE2啟動子活性的影響設(shè)計ACE2啟動子PCR擴增引物，PCR擴增、電泳后切膠，并行PCR產(chǎn)物回收，連接T載體和細(xì)胞轉(zhuǎn)化，構(gòu)建ACE2啟動子載體PGL3ACE2PROMOTER，利用INVITROGENLIP2000將啟動子載體與PRLTK載體共轉(zhuǎn)染平滑肌細(xì)胞24小時后，給予牽張力10％ELONGATION，1HZ刺激3小時或靜止培養(yǎng)3小時，利用PROMEGA雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測牽張力10％ELONGATION，1HZ對ACE2啟動子活性的影響。23、確定介導(dǎo)生理牽張力10％ELONGATION，1HZ調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞ACE2表達的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子1靜態(tài)對照組靜態(tài)培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞，不給予任何通路抑制劑干預(yù)。2牽張力對照組分別給予HASMCS牽張力干預(yù)15MIN、30MIN、1H、2H。3SN50組先給予HASMCSSN5018ΜM預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6小時。4CURCUMIN組先給予HASMCSCURCUMIN10UM預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6小時。5WP631組先給予HASMCSWP631100NM預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6小時。WESTERNBLOT檢測P65、PP65、CFOS、PCFOS、CJUN、PCJUN、SP1、PSP1、ACE2蛋白表達實時熒光定量PCR檢測ACE2MRNA變化EMSA檢測NFΚ3、AP1的DNA結(jié)合能力24、MAPK信號通路在牽張力10％ELONGATION，1HZ調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞ACE2表達中的作用1靜態(tài)對照組靜態(tài)培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞，不給予任何通路抑制劑干預(yù)。2牽張力對照組分別給予HASMCS牽張力刺激15MIN、30MIN、1H、2H。3PD98059組先給予HASMCSERK12抑制劑PD9805930UM預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6H。4SP600125組先給予HASMCSJNK12抑制劑SP600125（20ΜM）預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6H。5SB203580組先給予HASMCSP38抑制劑SB20358010ΜM預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6H。WESTERNBLOT檢測ERK12、PERK12、P38、PP38、JNK12、PJNK12、ACE2的蛋白表達實時熒光定量PCR檢測ACE2MRNA變化并檢測下游轉(zhuǎn)錄因子的活性。25、PKCⅡ信號通路在牽張力10％ELONGATION，1HZ調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞ACE2表達中的作用1靜態(tài)對照組靜態(tài)培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞，不給予任何通路抑制劑干預(yù)。2牽張力對照組分別給予HASMCS牽張力刺激15MIN、30MIN、1H、2H。3CG53353組先給予HASMCSPKCΒⅡ抑制劑CG53353（100NM）預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6H。觀察PKCΒⅡ的磷酸化水平ACE2MRNA及蛋白表達水平下游轉(zhuǎn)錄因子的活性。26、AKT信號通路在牽張力10％ELONGATION，1HZ調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞ACE2表達中的作用1靜態(tài)對照組靜態(tài)培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞，不給予任何通路抑制劑干預(yù)。2牽張力對照組分別給予HASMCS牽張力刺激15MIN、30MIN、1H、2H。3LY294002組先給予HASMCSAKT抑制劑LY29400250ΜM預(yù)處理1小時，再給予牽張力刺激6H。觀察AKT、PAKT的表達ACE2MRNA、蛋白表達水平。3實驗方法應(yīng)用實時定量PCR法檢測ACE2MRNA的表達量用WESTERNBLOT技術(shù)檢測信號蛋白表達和磷酸化水平EMSA檢測AP1、NFΚB與DNA的結(jié)合活性。4統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。使用SPSS160軟件中的單因素方差分析對結(jié)果進行分析，兩兩比較采用T檢驗。P＜005認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1牽張力對ACE2MRNA穩(wěn)定性無明顯影響給予HASMCS10％周期性牽張力干預(yù)12小時后，與放線菌

簡介：皮膚是阻止微生物、化學(xué)物質(zhì)等侵入以維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的屏障，燒傷主要損害是皮膚壞死，大面積皮膚缺損可引起全身的改變。因而創(chuàng)面處理是燒傷救治的重要環(huán)節(jié)之一，大面積皮膚缺損創(chuàng)面的覆蓋與修復(fù)一直是臨床醫(yī)師倍感棘手的問題。燒傷創(chuàng)面的修復(fù)是一個十分復(fù)雜的生物學(xué)過程，包括炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和遷移、膠原與細(xì)胞外基質(zhì)的沉積以及再上皮化等。目前，燒傷創(chuàng)面修復(fù)方法主要是以局部治療為主。大面積深度燒傷患者由于自體皮源不足，多年來運用網(wǎng)狀植皮、郵票植皮、小皮片移植、微粒植皮等技術(shù)來擴大皮膚覆蓋面積，取得了較好的臨床效果。但這些方法皮膚擴增面積有限，難以滿足大面積皮膚缺損患者盡早封閉創(chuàng)面的需求，在加快創(chuàng)面愈合的速度和改進創(chuàng)面愈合質(zhì)量，從而在減少功能障礙的發(fā)生率和提高患者生活質(zhì)量方面，目前常規(guī)應(yīng)用的這些方法顯然還存在著很多不足。組織工程學(xué)的興起和發(fā)展，為臨床解決這一難題提供了嶄新的思路和途徑。組織工程將體外分離、培養(yǎng)的高濃度的功能相關(guān)的活細(xì)胞種植于天然的、人工合成的支架上，使之植入人體后能夠形成新的有功能的組織，來制造、保存或修復(fù)失去的組織功能。組織工程化人體組織或器官產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的一個關(guān)鍵因素是植入足夠數(shù)量的、不引起免疫反應(yīng)的、具有再生活力的細(xì)胞。其中種子細(xì)胞的體外培養(yǎng)擴增成為組織工程學(xué)中的重要環(huán)節(jié)。理想的種子細(xì)胞應(yīng)具有容易獲得，容易體外培養(yǎng)增殖，長期傳代不改變生物學(xué)特征，抗原性小，組織修復(fù)能力強等特征。目前，有關(guān)皮膚種子細(xì)胞的研究主要集中在表皮細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)和表皮干細(xì)胞研究，以及胚胎干細(xì)胞向表皮細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化等幾個方面。表皮細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)雖已有成功應(yīng)用的報道，但仍存在生產(chǎn)周期長、技術(shù)要求高和費用昂貴等諸多限制正常皮膚內(nèi)表皮干細(xì)胞數(shù)量有限，而大面積深度燒傷患者表皮干細(xì)胞來源更有限。同時表皮干細(xì)胞的分離、純化和培養(yǎng)技術(shù)尚不夠成熟；在胚胎干細(xì)胞方面，牽涉到倫理、技術(shù)等諸多障礙。因此有必要探索一條新的途徑來克服皮膚種子細(xì)胞的技術(shù)難度和瓶頸問題。近年來研究發(fā)現(xiàn)，骨髓組織除含有造血干細(xì)胞外，還含有另一類干細(xì)胞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS。MSCS具有干細(xì)胞的共性，即自我更新及多向分化能力。大量研究證實，在一定誘導(dǎo)條件下MSCS可向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞等中胚層細(xì)胞分化；同時MSCS還可以向外胚層的神經(jīng)元細(xì)胞和內(nèi)胚層的肝卵圓細(xì)胞分化。已有研究表明，把骨髓MSCS植入體內(nèi)，可向多種造血以外的組織如肺、骨、軟骨和皮膚等處定位并分化為相應(yīng)的組織細(xì)胞。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞不僅具有無限增殖、多向分化的潛能，而且還有明顯的可塑性，體內(nèi)移植后能遷移到病變部位并轉(zhuǎn)化為病變部位的細(xì)胞等特點。骨髓MSCS獲取簡便，簡單的骨髓穿刺即可獲得，體外培養(yǎng)條件不高，細(xì)胞分裂增殖快，MSCS可取自自體，不存在免疫排斥問題，即便是異體移植，由于骨髓MSCS屬于未分化的前體細(xì)胞，其細(xì)胞表型的分化尚不成熟，因而MSCS移植排斥反應(yīng)弱。而且MSCS體外基因轉(zhuǎn)染率高，故MSCS被認(rèn)為是良好的組織工程的種子細(xì)胞，具有潛在的臨床應(yīng)用前景。由此可見MSCS有可能作為皮膚組織工程的種子細(xì)胞，參與燒傷創(chuàng)面的愈合。WISTAR大鼠是醫(yī)學(xué)研究中使用最廣泛的實驗動物之一，本研究以WISTAR大鼠為研究對象，比較分析不同條件下分離和培養(yǎng)的大鼠MSCS的生物學(xué)特性，并對其進行鑒定，以建立一種簡單、有效、經(jīng)濟、實用的分離、培養(yǎng)MSCS的方法。將綠色熒光蛋白基因通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MSCS，觀察其是否可應(yīng)用于組織工程修復(fù)技術(shù)的細(xì)胞標(biāo)記。目的應(yīng)用不同方法分離和培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，優(yōu)化MSCS的分離方法，尋找一種經(jīng)濟、實用而又簡便的分離和培養(yǎng)MSCS的方法，為深入研究MSCS創(chuàng)造條件。方法分別采用全骨髓法直接貼壁法、PERCOLL分離液密度為1073G／ML及淋巴細(xì)胞分離液密度為1077G／ML梯度離心法分離MSCS，分別通過不同的首次換液時間進行培養(yǎng)，比較不同條件下分離和培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞鋪滿整個培養(yǎng)瓶的底部所需時間及細(xì)胞生長特性、生長曲線和細(xì)胞貼壁率的差異，同時應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和表面抗原CD44、CD90和CD45的表達。結(jié)果采用全骨髓法分離的骨髓細(xì)胞，首次換液時間為72H、96H進行培養(yǎng)后，獲得的細(xì)胞數(shù)量多，細(xì)胞貼壁后增殖較為迅速，貼壁細(xì)胞鋪滿整個培養(yǎng)瓶的底部所需時間均為6～7D，原代細(xì)胞純度不高，但傳代后，可獲得純度較高的MSCS；用密度為1073G／ML的PERCOLL分離液分離的骨髓細(xì)胞，首次換液時間為48H、72H、96H進行培養(yǎng)后，可獲得純度較高的MSCS，貼壁細(xì)胞鋪滿整個培養(yǎng)瓶的底部所需時間為13～21D；而應(yīng)用密度為1077G／ML淋巴細(xì)胞分離液分離不能培養(yǎng)出梭形成纖維細(xì)胞樣貼壁生長的MSCS；首次換液時間過早很難獲得成纖維樣貼壁生長的MSCS。傳代后，細(xì)胞生長迅速，采用全骨髓法及PERCOLL分離液分離培養(yǎng)的細(xì)胞第1、2、3代之間生長曲線相似呈S型，在接種后的第1天、第2天為細(xì)胞的潛伏適應(yīng)期，從第3天起細(xì)胞開始增殖并進入對數(shù)生長期，第6天左右細(xì)胞生長達頂點，以后進人平臺期，第8天時細(xì)胞數(shù)量有所減少。計算群體倍增時間采用直接貼壁法分離培養(yǎng)的第1、2、3代骨髓MSCS分別為302H、296H和292H，PERCOLL分離法分離培養(yǎng)的骨髓MSCS群體倍增時間分別是為298H、293H和290H。兩種方法分離培養(yǎng)的傳代細(xì)胞第1、2、3代之間的生長速度，經(jīng)方差分析P005，還不能認(rèn)為2種方法培養(yǎng)的細(xì)胞第L、2、3代細(xì)胞間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論本研究建立了體外分離純化、培養(yǎng)擴增大鼠骨髓MSCS的方法。應(yīng)用全骨髓法首次換液時間不少于72H，應(yīng)用密度為1073GML的PERCOLL分離方法首次換液時間不少于48H，進行培養(yǎng)可獲得成纖維樣貼壁生長的MSCS。PERCOLL分離法可以更好的提高MSCS的純度，但培養(yǎng)周期較長；全骨髓法培養(yǎng)周期短，但純度較差，傳代后細(xì)胞純度得以提高。第二部分增強型綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其穩(wěn)定表達和影響目的檢測增強型綠色熒光蛋白EGFP表達載體PEGFPC1對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSCS的轉(zhuǎn)染效率及其表達情況和對細(xì)胞生長的影響。為利用PEGFPC1轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提供依據(jù)。方法PEGFPC1質(zhì)粒經(jīng)體外擴增、提取、純化后，經(jīng)酶切鑒定；以全骨髓法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，取生長良好的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；以脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染PEGFP，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率及熒光表達情況；通過G418篩選出抗性克隆，進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，觀察熒光持續(xù)時間并檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生長曲線。結(jié)果綠色熒光蛋白在基因轉(zhuǎn)染24H后開始表達，PEGFP轉(zhuǎn)染MSCS的效率為12％，經(jīng)過G418篩選后形成抗性克隆，表達持續(xù)4周以上，但熒光逐漸減弱。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞生長較未轉(zhuǎn)染細(xì)胞慢PO05。HE染色結(jié)果治療組創(chuàng)面愈合質(zhì)量均好于對照組。PCR檢測結(jié)果表明，在治療組受體鼠的創(chuàng)面組織細(xì)胞有供體鼠Y染色體基因的表達；而且靜脈注射組骨髓組織中也檢測到了SRY基因的表達。免疫組織化學(xué)染色顯示對照組燙傷后7D真皮深層血管內(nèi)皮細(xì)胞PCNA表達，14D呈強陽性，到21D、28D表達有所下降為。治療組PCNA表達與對照組無明顯差異；對照組燙傷后7D血管內(nèi)皮細(xì)胞FAK表達，14D呈，到21D、28D表達有所下降為；靜脈注射組和局部注射組無明顯差異，燙傷后7D血管內(nèi)皮細(xì)胞FAK表達14D呈強陽性，到21D、28D表達迅速下降為。對照組燙傷后7D，成纖維細(xì)胞胞漿中BFGF表達，14D新生肉芽組織表達增強，到21D、28D表達下降為。靜脈注射組和局部注射組無明顯差異燙傷后7DBFGF表達，14D新生肉芽組織表達強陽性，21D、28D表達下降。結(jié)論大鼠供體骨髓MSCS對其受體皮膚深Ⅱ度燙傷具有明顯的治療作用。燙傷促使骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向創(chuàng)面遷移并參與燙傷創(chuàng)面愈合。

簡介：分類號～UDCY997187密級～編號，中南大學(xué)CENTRALSOUTHUNIVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目學(xué)科專業(yè)；研究生姓名導(dǎo)師姓名及其盔窒透鑾宣亟疸紲胞鰒生物堂硒塞痘堡堂皇瘟堡生理堂揚垂對照比較有36個基因呈現(xiàn)差異表達，促進細(xì)胞增殖的基因在44F10組中表達上調(diào)，而在48A9組中限制細(xì)胞增殖的基因表達上調(diào)。差異性表達主要涉及細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基因。結(jié)論空間環(huán)境可影響腫瘤細(xì)胞的生理特性，并且誘導(dǎo)細(xì)胞的變異是多向性的。而太空誘變宮頸癌細(xì)胞的差異基因表達是細(xì)胞生物學(xué)行為改變的原因。芯片關(guān)鍵詞空間環(huán)境，宮頸癌，生物學(xué)特性，差異表達基因，基因II

簡介：點擊查看更多三株抗人促紅細(xì)胞生成素單克隆抗體的獲得及其生物學(xué)特性的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：Y994170四川碩士學(xué)學(xué)校代碼10610學(xué)號S032675大學(xué)位論文人成骨肉瘤順鉑耐藥細(xì)胞系的建立題目壁壘翅堂掛掛亞窶作?？创谷蜆I(yè)壁整堂L量塹2二00六年四月四』II大學(xué)華兩臨床醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人成骨肉瘤順鉑耐藥細(xì)胞系的建立及生物學(xué)特性研究研究生張文韜導(dǎo)師屠重棋副教授摘要目的建立順鉑誘導(dǎo)的人成骨肉瘤多藥耐藥細(xì)胞系MG63／R并觀察其生物學(xué)特性。方法以順鉑為誘導(dǎo)劑，采用大劑量沖擊與逐步增ONJ；FJ量相結(jié)合的方法誘導(dǎo)人成骨肉瘤MG63細(xì)胞，建立多藥耐藥細(xì)胞系MG63／R。MTT法檢測藥物敏感性；光鏡、透射電鏡觀察MG63、MG63／R細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)變化生長曲線、克隆形成試驗檢測細(xì)胞增殖能力；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期、凋亡指數(shù)、PGP、BCL2、P53蛋白表達。結(jié)果1經(jīng)順鉑186天的誘導(dǎo)建立TMG63／R，MG63／R對順鉑的耐藥指數(shù)為83557，QN霉素、長春新堿、氨甲蝶呤、環(huán)磷酰氨亦產(chǎn)生不同程度的交叉耐藥；2光鏡觀察可見MG63／R細(xì)胞排列不規(guī)則，形態(tài)呈三角形、多角形及多核現(xiàn)象透射電鏡顯示撼63／R細(xì)胞表面突起增加，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富；3細(xì)胞周期分析顯示MG63／R細(xì)胞G。／G。期868116％，S期為11，72，5％；MG63細(xì)胞G。／C期為907138％，S期為00L141％而MG63／R細(xì)胞凋亡明顯降低；

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文CD133陽性造血祖細(xì)胞對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名熊漢真申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師李學(xué)農(nóng)20080520中文摘要腫瘤模型上得到證實，由于臍血來源廣泛，獲取較容易，成為骨髓及外周造血干祖細(xì)胞的極佳替代來源，我們選定CDL33造血祖細(xì)胞，在減少其誘導(dǎo)分化的同時，觀察其對低轉(zhuǎn)移人大腸癌細(xì)胞體內(nèi)外的增殖和侵襲作用。CDL33是一個目前公認(rèn)的造血祖細(xì)胞表面抗原，在正常及異常造血和非造血組織中均有表達，隨著細(xì)胞的分化成熟其表達減弱、消失。在正常造血組織中，如人胚胎、肝臟和骨髓、臍血、成人骨髓和外周血CD34細(xì)胞中都可檢測到CDL33MRNA，而在其他成熟血細(xì)胞均未檢測到其表達。同時隨著最新的研究表明，CDL33MRNA在外周血中的表達里，實體惡性腫瘤轉(zhuǎn)移患者的表達水平明顯高于非轉(zhuǎn)移患者，且以骨轉(zhuǎn)移患者的CDL33MRNA表達為著。但這一結(jié)果的作用機制主要是由于CDL33造血祖細(xì)胞或者是CDL33腫瘤干細(xì)胞的結(jié)果尚不清楚。本研究重點探討CDL33造血祖細(xì)胞對結(jié)直腸癌增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的影響，闡明CDL33造血祖細(xì)胞在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的主要生物學(xué)功能，為揭示結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移機制及抗轉(zhuǎn)移治療奠定基礎(chǔ)。方法1CDL33造血祖細(xì)胞的篩選、鑒定及培養(yǎng)由南方醫(yī)院婦產(chǎn)科提供新鮮臍血標(biāo)本20例，在臍血采集后6H內(nèi)，利用CDL33免疫磁珠，分離出CDL33造血祖細(xì)胞，并分別予流式細(xì)胞儀及免疫細(xì)胞染色分析和鑒定樣本量中CDL33細(xì)胞含量，同時在減少誘導(dǎo)CDL33分化的同時，培養(yǎng)CDL33造血祖細(xì)胞。2CDL33造血祖細(xì)胞對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響將CDL33造血祖細(xì)胞與SW480共趨化培養(yǎng)，用MTT法檢測腫瘤細(xì)胞的增殖及黏附能力的影響，用TRANSWELL小室法檢測腫瘤細(xì)胞的遷移能力的變化，用WESTERNBLOT了解VEGFR1、MMP2、ECADHERIN的表達情況。觀察CDL33造血祖細(xì)胞作用前后細(xì)胞增殖、體外侵襲變化。3應(yīng)用整體可視化結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移動物模型觀察共移植效應(yīng)

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文NHE1基因調(diào)控細(xì)胞內(nèi)酸堿平衡對SGC7901胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名滕小春申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師劉海峰20040501英文縮寫A260A280BPBCECFCDNADNADABDNTPDADMEMDMSOEDTAKBLBMTTMRNANHENHELODORIPAPIPBS英文縮寫詞一覽表英文全稱ABSORBANCCAT260NMABSORBANCEAT280NMBASEPAIRS2，7一BISCAEBOXYETHYL5OR6一CARBOXYFLUORESCEINCOMPLEMENTARYDEOXYRIBONUCLEICACIDDEOXYRIBONNUCLEICACID33“DIAMIONBENZIDENEDEOXYNUCIEOSIDETRIPHOSPHATEDALTONDULBECCOSMINIMUMESSENFIALDULBECCOS∞RMODIFIEDEAGLEMEDIUMDIMETHYLSULFOXIDEETHYLENDIAMINOTETRAACETICACIDKILOBASEPAIRLURIABERTANI3一4，5一DIMETHYL一2一THIAZOLY2，5一DIPHENY一2HTETRAZALIUMBROMIDEMESSENGERRIBONUCLEICACIDNA一HEXCHANGERNA一HEXCHANGERLOPTICALDENSITYORIGINOFREPLICATIONPASCALPROLIFERATIVEINDEXPHOSPHATEBUFFEREDSALINE中文全稱260NM處吸光度280RIM處吸光度堿基對2’，7’耳J基熒光素互補DNA脫氧核糖核酸3，3’一二氨基聯(lián)苯胺脫氧核苷三磷酸道爾頓極限必需培養(yǎng)基二甲基亞砜乙二胺四乙酸千堿基對LB培養(yǎng)基二苯基四氮唑溴鹽信使核糖核酸鈉。氫交換泵鈉氫交換泵第1亞型光密度復(fù)制起點帕壓力單位增殖指數(shù)磷酸緩沖鹽水

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文PSMA對前列腺癌LNCAP細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究姓名曾樂祥申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師郭正輝20100531中山大學(xué)碩士學(xué)位論文PSMA對前列腺癌LNCAP細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究分低的病例，并且PSMA在腫瘤新生血管系統(tǒng)表達，而在正常組織血管內(nèi)皮不表達。終上所述，我們猜測PSMA與前列腺癌細(xì)胞的增殖、分裂、遷移、侵襲等行為是否存在著一定的聯(lián)系本課題組的前期研究針對PSMA構(gòu)建了SHRNA慢病毒載體，轉(zhuǎn)染能高表達PSMA的前列腺癌LNCAP細(xì)胞后，通過REALTIMEPCR檢測PSMAMRNA的表達水平，通過WESTERNBLOT檢測PSMA蛋白的表達水平，發(fā)現(xiàn)PSMA的MRNA和蛋白均能被穩(wěn)定抑制，從而獲得了能穩(wěn)定低表達PSMA的前列腺癌LNCAP細(xì)胞。同時也培養(yǎng)了未處理的前列腺癌LNCAP細(xì)胞及獲得了轉(zhuǎn)染了與人類基因無同源性、對PSMA不起干擾作用的SIRNA的前列腺癌LNCAP細(xì)胞。研究目的研究PSMA對前列腺癌LNCAP細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，為進一步研究PSMA在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起的作用打下基礎(chǔ)。研究方法實驗分組1PSMA基因被穩(wěn)定抑制的前列腺癌LNCAP細(xì)胞株實驗組；2未進行處理的前列腺癌LNCAP細(xì)胞株空白組；3轉(zhuǎn)染了與人類基因無同源性、對PSMA不起干擾作用的SIRNA的前列腺癌LNCAP細(xì)胞株對照組。以上述三組細(xì)胞為實驗對象，分別進行M實驗、流式檢測細(xì)胞周期、細(xì)胞劃痕實驗、TRANSWELL實驗，從而比較不同組細(xì)胞的生物學(xué)行為的變化。MTT實驗處理后在特定時間點測定相應(yīng)的OD值，檢測不同組細(xì)胞的增殖能力，繪制生長曲線。流式檢測細(xì)胞周期通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，根據(jù)處于細(xì)胞周期中S

簡介：天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文CD44在前列腺癌細(xì)胞遷移、增殖中作用的分子生物學(xué)基礎(chǔ)的研究姓名崔衛(wèi)國申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（泌尿外）指導(dǎo)教師徐勇20040501墨鲞墾型查蘭蔓主蘭墮墮塞作用進行了基本的探討。其中包括1．使用不同的PRESENILIN抑制劑觀察其對前列腺癌PC一3細(xì)胞遷移和增殖表型的不同影響。2．觀察過量表達包含不同結(jié)構(gòu)域的CD44分子對前列腺癌PC一3細(xì)胞遷移和增殖表型的不同影響。3．通過細(xì)胞組分分析和共聚焦顯微鏡直接觀察的方法研究CD44．ICD釋放后的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位。4．通過對常見轉(zhuǎn)錄因子報告基因和信號傳導(dǎo)通路的檢測，研究釋放并轉(zhuǎn)移進核后的CD44．ICD，可能的基因調(diào)控通路。5．通過RNA干涉和反義RNA技術(shù)消除CD44基因在前列腺癌PC．3細(xì)胞中的表達，進而考察下調(diào)CD44表達對腫瘤惡性表型的逆轉(zhuǎn)。另外，上述實驗中使用明膠酶譜分析、“劃痕”法和MATRIGEL包被的TRANSWELL法等檢測PC3細(xì)胞的遷移表型；使用MTT法檢測細(xì)胞存活和生長，TUNE／法檢測細(xì)胞的凋亡。結(jié)果1．前列腺癌PC一3細(xì)胞中檢測到CD44和PRESENILINL／2的表達。2．PRESENILIN抑制劑DAPT和DUPE下調(diào)PC一3細(xì)胞中MMP9的表達，抑制了PC．3細(xì)胞劃痕后的修復(fù)和在MATRIGEL中的侵襲但另一種PRESENILIN抑制劑JLK2沒有上述抑制細(xì)胞迂移的效應(yīng)。3．DAPT和DUPE處理的PC．3細(xì)胞存活率第3天開始下降，而且誘導(dǎo)細(xì)胞大量凋亡；JLK2處理的細(xì)胞存活正常，幾乎沒有凋亡。4．過表達CD44AE和CD44ICD的PC．3細(xì)胞遷移力明顯高于過表達CD44FL的細(xì)胞；過表達CD44FL、CD44AE和CD44ICD的PC一3細(xì)胞增殖率均有所升高，而且轉(zhuǎn)染CD44FL、CD44AE和CD44TCD并未誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。5．DAPT和DUPE阻斷了CD44ICD從膜結(jié)合型CD44AE的水解釋放，JLX2沒有此種阻斷效應(yīng)。6．CD44ICD可以逆轉(zhuǎn)DAPT對PC一3細(xì)胞中MMP9的表達的抑制作用。7．CD441CD從膜結(jié)合型CD44AE的水解釋放后轉(zhuǎn)移進核，并可能通過調(diào)控NFRD3等轉(zhuǎn)錄因子影響其下游信號通路傳導(dǎo)。8．RNAI}I1反義RNA技術(shù)均可有效的消除內(nèi)、外源性CD44的表達。

簡介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文IL18基因修飾大腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)性狀的改變及抗腫瘤作用的研究姓名韓明勇申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師鄭樹20050101浙江人學(xué)博。I二研究生畢業(yè)論文應(yīng)答的誘導(dǎo)和效應(yīng)階段具有重要的作剛。在免疫應(yīng)谷的起始階段，細(xì)胞網(wǎng)子是必不可少的，細(xì)胞因子有調(diào)控免疫應(yīng)答、活化效應(yīng)細(xì)胞的復(fù)雜功能，尤其是CTL等效麻細(xì)胞的誘生更是離不開諸如IL一2等細(xì)胞因子，岡此將細(xì)胞因子編碼基網(wǎng)導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞制備的腫瘤瘤莒可增強瘤苗的特異性免疫應(yīng)答9J。應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)，采_I{J轉(zhuǎn)基囡手段以某些細(xì)胞網(wǎng)子基因修飾腫瘤細(xì)胞，提高其免疫原性或活化效應(yīng)細(xì)胞的能力是舯瘤疫苗新的研究熱點”“。YEIT”1等將GMCSF基岡修飾黑色素瘤細(xì)胞，其表達定能于黑色素瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜上，結(jié)果發(fā)現(xiàn)能促進瘤苗細(xì)胞與GMCSF受體陽性APC細(xì)胞的相互作用而增強腫瘤抗原的遞早，在小鼠模玳體內(nèi)誘導(dǎo)了比分泌性GMCSF更強的免疫應(yīng)答，并對野生型腫瘤細(xì)胞的攻擊更具保護力。白細(xì)胞介素．18INTERLEUKIN．18，IL．18是近年發(fā)現(xiàn)的一種多功能免疫調(diào)訂蚩向。它在體內(nèi)分布廣泛，而且作用呈多樣化，除了誘導(dǎo)多種細(xì)胞岡子產(chǎn)生、上調(diào)FAS配體的表達，介導(dǎo)T細(xì)胞及NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性、增強機體臼然防御羽I抗腫瘤機能等作Ⅲ外研究表明IL．18也是一種炎性因子，還與骨代謝、神經(jīng)羊¨造血功能有關(guān)I”“”。IL一18能明顯誘導(dǎo)IFN．Y、IL．2、TNF．N的產(chǎn)生，增強由FAS配體介導(dǎo)的NK細(xì)胞、T細(xì)胞和骨髓單核細(xì)胞的細(xì)胞毒活性等方面作_I|{，因而IL18具有顯著的抗腫瘤能力。研究發(fā)現(xiàn)【“1，給移植METHA肉瘤的小鼠預(yù)先注射IL．18后有90％PA上的實驗動物能K期存活。MICZLLEFT5】等研究發(fā)現(xiàn)腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射IL18可以引發(fā)機體對腹腔內(nèi)注射的白體METHA肉瘤產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)，但皮R注射則無效。C26腫瘤細(xì)胞接種裸鼠后在1326天連續(xù)注射IL18能有效抑制舯瘤細(xì)胞的生長，可完全抑制其肺部轉(zhuǎn)移，裸鼠的生存期明顯延|支。IL18的處理也能明顯抑制MCA205肉瘤的生K，并且即使是接種后7天再處理也有效。同樣在小鼠黑色素瘤細(xì)胞株CL81接種斤連續(xù)7大腹腔注射IL一18LUG／只，可明顯抑制腫瘤的生K，使腫瘤生成瘤率由60％降至20％。另外，IL18對小鼠神經(jīng)角質(zhì)瘤也有明顯的殺傷效應(yīng)㈣?；贗L．18的明顯抗腫瘤作Ⅲ，本研究構(gòu)建含IL．18基岡的分泌型真核表達質(zhì)粒將該真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人腸癌細(xì)胞系SW480細(xì)胞，觀察IL．18基岡轉(zhuǎn)導(dǎo)歷人腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的變化；將IL一18基岡轉(zhuǎn)染后的SW480細(xì)胞滅活，制備人腸癌基岡I群腫瘤疫茸，觀察其抗瘤作用。本課題內(nèi)容分為四部分1含HLL．18基岡的分泌型真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建2高表達HLL一18的太腸癌單克隆細(xì)胞株的建立；3HLL一18基岡修飾人腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的政變；4HLL一18基岡修飾人腸癌細(xì)胞腫瘤疫苗的制備及抗瘤作川研究。2

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)卜，由本人獨矗完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)曠MJ北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科入學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使川。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第。‘署名單位為河北醫(yī)科人學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、中報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均曠1河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。，≮蕊麓、研究生簽名律翔闕F導(dǎo)師簽章寺亂二級學(xué)院羲尊麓喜Ⅲ簿}瀨蹲嗣‘、。、．、、，∥。4河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)卜．進行的研究T作及取得的研究成果，除J7文中特另,JDH以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中小包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果，J}}導(dǎo)教師對此進行了市定。水淪義由本人獨立撰J，文責(zé)自負(fù)。研究牛簽名糊嘲}導(dǎo)師簽章于氟．。F與年弓月穸H中文摘要MIR139．5P與結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)功能的關(guān)聯(lián)研究摘要目的結(jié)腸癌COLONCANCER是常見的消化道惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢，在西方國家，結(jié)腸癌的發(fā)病率位于世界第二位，而在我國，它的發(fā)生率和死亡率則位于第四位，目前結(jié)腸癌在其早期診斷、早期治療方面取得了一定的成效，但其預(yù)后及5年生存率仍很低。本研究通過觀察MIR139．5P的表達對結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期、侵襲和遷移的影響，初步探討MIR0139．5P在結(jié)腸癌發(fā)展過程中的作用，為結(jié)腸癌的早期篩查、基因的靶向治療以及預(yù)后提供理論依據(jù)。方法通過RTPCRREAL．TIMEPOLYMERASECHAINREACTION分析了95對結(jié)腸癌和癌旁正常組織以及所有的7種人類結(jié)腸癌細(xì)胞中MIR139．5P的表達水平；采用瞬時轉(zhuǎn)染的方法，將PRE．MIR139．5P和PREMIRCTRL分別轉(zhuǎn)染到結(jié)腸癌細(xì)胞株中，RTPCRREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION檢測其轉(zhuǎn)染效率；MTT法繪制出細(xì)胞生長曲線，TRANSWELL法檢測細(xì)胞的侵襲和遷移能力，流式細(xì)胞儀對轉(zhuǎn)染的結(jié)腸癌細(xì)胞株進行凋亡和細(xì)胞周期分析；最后通過WESTERNBLOT和PCR的方法驗證了與細(xì)胞侵襲、遷移及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達情況。采用●TTEST方法對分別轉(zhuǎn)染MIR139．5P和MIRCTRL的結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡、及細(xì)胞周期方面進行檢驗和分析。結(jié)果1．通過實時定量PCR分析得出，與癌旁正常組織相比，MIR139．5P在結(jié)腸癌組織中表達是明顯降低的尸O．O001，MIR1395P的表達下調(diào)與結(jié)腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在著明顯的關(guān)聯(lián)儼O．031。同時與正常結(jié)腸細(xì)胞相比，在人類的7種結(jié)腸癌細(xì)胞中MIR139．5P的表達沉默或者減少。這些揭示了MIR139．5P在結(jié)腸癌中可能是一個潛在的腫瘤抑制因子。2．細(xì)胞生物學(xué)功能方面，通過細(xì)胞活力測定MTT和集落形成實驗，MIR139．5P在結(jié)腸癌細(xì)胞株DLDL，HCTLL6，SWLLL6中的表達可以明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長PO．0001，P0．0002，盧0．0022和集落的形成伊0．05。

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簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文IMPORTAZOLE和FENRETINIDE對骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其機制研究EFFECTSOFIMPORTAZOLEANDFENRETINIDEONTHEBIOLOGICALCHAR?！癥ELOMACELLSANDTHEUNDERLYINGACTERLSTLCSOIMYCELLSANTEERWMRCNARMECHANISMS本課題由國家自然科學(xué)基金資助81172248碩士研究生顏文青指導(dǎo)老師侯健教授學(xué)科專業(yè)內(nèi)科學(xué)血液病學(xué)培養(yǎng)單位第二軍醫(yī)大學(xué)研究生院二。一三年五月目錄中文摘要一1一英文摘要3縮略詞表5前言7刖舌’7第一部分IMPORTAZOLE對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響一10一實驗材料與主要器材一10實驗方法一11一實驗結(jié)果20討論33結(jié)論一34第二部分FENRETINIDE對多發(fā)性骨髓瘤側(cè)群細(xì)胞生物學(xué)特性的影響35實驗材料及主要器材35實驗結(jié)果一39一討論52結(jié)論一53一參考文獻54一綜述一56一研究生在讀期間發(fā)表的論文63致謝64