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文檔簡介
1、目的:探討成人外周血來源的平滑肌祖細胞(smooth muscle progenitorcells,SPCs)與成熟血管平滑肌細胞(smooth muscle cells,SMCs)細胞形態(tài)、增殖潛能等方面的異同點,為血管組織工程提供可靠的種子細胞來源。
方法:1、密度梯度離心法分離成人外周血中單個核細胞,于用纖粘連蛋白包被的含血小板衍生生長因子BB(Platelet derived growth factorBB,PDG
2、F-BB)和EGM-2培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)變化,常規(guī)換液、傳代、凍存及復蘇。
2、通過手術取得實驗用大隱靜脈3cm,采用膠原蛋白酶消化、差異貼壁法原代培養(yǎng),含PDGF-BB的EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng),觀察細胞形態(tài),獲得平滑肌細胞。
3、平滑肌祖細胞及平滑肌細胞分別進行細胞爬片,應用細胞免疫熒光檢測平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和調寧蛋白(calponin1)的表達。
4、用RT-PC
3、R檢測平滑肌肌動蛋白(alpha-smooth muscle actin,a-sma)和調寧蛋白(calponin1,cap)的mRNA表達。
5、MTT(四唑鹽比色實驗)分別檢測第6代平滑肌祖細胞與平滑肌細胞的增殖能力。
結果:1、SPCs傳代細胞培養(yǎng)達80-90%融合時,呈螺旋狀排列,并可呈典型“峰、谷”樣形態(tài),符合平滑肌細胞形態(tài)學特征。
2、平滑肌祖細胞可表達平滑肌細胞特異性標記α-SMA
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