簡(jiǎn)介：摘要目的機(jī)械牽張應(yīng)力刺激BMSCS成骨分化是牽張成骨、正畸牙移動(dòng)以及骨折愈合過(guò)程中新骨生成的關(guān)鍵細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。BMSCS是一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞，也是對(duì)機(jī)械應(yīng)力最敏感細(xì)胞之一。既往研究已證實(shí)牽張力可以誘導(dǎo)BMSCS成骨向分化。P38MAPK信號(hào)通路在炎癥反應(yīng)，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和細(xì)胞分化等方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用，既往研究也發(fā)現(xiàn)P38MAPK與間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化關(guān)系密切。OSTERIX是一種含鋅指轉(zhuǎn)錄因子，在成骨細(xì)胞特異表達(dá)，是成骨分化和骨生成的關(guān)鍵因素。研究表明機(jī)械力刺激可誘導(dǎo)OSTERIX高表達(dá)。然而，目前有關(guān)P38MAPK信號(hào)通路和OSTERIX與機(jī)械牽張力促進(jìn)小鼠BMSCS成骨分化的關(guān)系以及二者間相互關(guān)系的研究，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有報(bào)道。本研究擬以小鼠BMSCS為研究對(duì)象，配合多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng)，構(gòu)建小鼠BMSCS體外培養(yǎng)一力學(xué)刺激模型、OSTERIX基因沉默BMSCS模型。研究P38MAPK信號(hào)通路和OSTERIX與機(jī)械牽張力促進(jìn)小鼠BMSCS成骨分化的關(guān)系以及二者間的相互關(guān)系。我們的研究為細(xì)胞生物力學(xué)刺激成骨方面的機(jī)制提供了參考，可以根據(jù)其發(fā)展趨勢(shì)做進(jìn)一步研究，為臨床治療提供理論依據(jù)。方法BMSCS原代培養(yǎng)無(wú)菌下剝離C57BL／6J近交系小鼠雙側(cè)股骨和脛骨，應(yīng)用全骨髓法進(jìn)行原代BMSCS體外培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)、多向誘導(dǎo)分化及流式細(xì)胞表面分子鑒定。以體外原代培養(yǎng)的BMSCS為研究對(duì)象，通過(guò)成功構(gòu)建BMSCS體外培養(yǎng)一力學(xué)刺激模型，使用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng)對(duì)BMSCS加載力學(xué)刺激。將C57BL／6J小鼠BMSCS分為空白對(duì)照組、牽張力組和牽張力阻斷組SB203580一種P38MAPK通路抑制劑牽張力，采用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng)，施加頻率為0，5HZ，振幅為08％的牽張力，每天2次，每次30MIN，分別在實(shí)驗(yàn)第1、3、5天收獲BMSCS細(xì)胞。間斷性牽張力作用后，REALTIMEPCR檢測(cè)成骨基因ALP、COLI、OCN及OSTERIX的MRNA表達(dá)變化情況，WESTERNBLOTTING檢測(cè)及OSTERIX蛋白和PP38MAPK蛋白的表達(dá)情況。用SB203580抑制P38MAPK信號(hào)通路后，WESTERNBLOTTING檢測(cè)及OSTERIX蛋白和PP38MAPK蛋白的表達(dá)情況，REALTIMEPCR檢測(cè)成骨基因ALP、COLI、OCN及OSTERIX的MRNA表達(dá)變化情況。通過(guò)SIRNA技術(shù)沉默小鼠BMSCS的OSTERIX基因，WESTERNBLOTTING檢測(cè)OSTERIX蛋白的表達(dá)情況，REALTIMEPCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因ALP、COLI、OCNMRNA的表達(dá)量變化情況。應(yīng)用SPSSL70統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1C57BL／6J小鼠BMSCS傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定，呈梭形；流式細(xì)胞鑒定結(jié)果顯示第2代BMSCS細(xì)胞均一性在90％以上，CDLLB、CD34、CD45陰性細(xì)胞比例分別為587％、O43％、443％CD44、CDL05、SCA1陽(yáng)性細(xì)胞比例分別為9967％、9980％、9981％。ABSTRACTOBJECTIVETHEOSTEOGENICOFBONEMARROWMESENCHYMALCELLSCAUSEDBYMECHANICALSTRETCHISTHEKEYCELLULARBASISOFDISTRACTIONOSTEOGENESIS，ORTHODONTICTOOTHMOVEMENTANDNEWBONEFORMATIONDURINGFRACTUREHEALINGBMSCSNOTONLYBEAKINDOFMULTIPOTENTSTEMCELLS，BUTALSOBEONEOFTHEMOSTSENSITIVECELLOFMECHANICALSTRESSPREVIOUSSTUDIESHAVEDEMONSTRATEDTHATSTRETCHCOULDINDUCEBMSCSOSTEOBLASTICDIFFERENTIATIONP38MAPKSIGNALINGPATHWAYPLAYACRUCIALROLEININFLAMMATORYREACTIONCELLCYCLEREGULATIONANDCELLULARDIFFERENTIATION，PREVIOUSSTUDIESHAVEFOUNDTHATP38MAPKPATHWAYHADAIMPORTANTROLEINMESENCHYMALSTEMCELLSDIFFERENTIATEINTOOSTEOBLASTSOSTERIXISAZINCFINGERTRANSCRIPTIONFACTORSPECIFICLYEXPRESSIONINOSTEOBLAST，ISAKEYFACTORINOSTEOBLASTDIFIERENTIATIONANDBONEFORMATIONRESEARCHSSHOWSTHATMECHANICALSTIMULATIONCANINDUCEHIGHEXPRESSIONOFOSTERIXHOWEVERTHEREHASABOUTTHERELATIONSHIPBETWEENP38MAPKSIGNALINGPATHWAYOSTERIXANDOSTEOBLASTICDIFFERENTIATIONOFBMSCSBYMECHANICALSTRETCHTHISPAPERINTENDSTODEVELOPINGAMECHANICALSTIMULATIONMODELOFBMSCSINVITROUSINGAMULTICHANNELCELLSTRAINLOADINGSYSTEMANDOSTERIXGENESILENCINGOFBMSCSMODELTOLEAMTHERELATIONSHIPBETWEENP38MAPKSIGNALINGPATHWAYOSTERIXANDOSTEOBLASTICDIFFERENTIATIONOFBMSCSBYMECHANICALSTRETCH0URSTUDYWOULDCONTRIBUTETHEUNDERSTANDINGOFTHEBONEBIOMECHANICALSTIMULATIONMECHANISM，ANDFORTHEFURTHERSTUDYANDPROVIDEATHEORETICALBASISFORCLINICALTREATMENTMETHODSBMSCSPRIMARYCULTURESTRIPPPINGTHEBILATERALFEMURANDTIBIAOFTHEINBREDSTRAINSOFMICEFC57BL／6JINASEPTICHAVESTINGBMSCSBYWHOLEMARROWMETHODOFOBSERVEDTHECELLMORPHOLOGYUNDERINVERTEDMICROSCOPEMULTIDIRECTIONALDIFFERENTIATIONANDCELLSURFACEMOLECULARWEREIDENTIFICATIONBMSCSSERVEDASTHERESEARCHOBJECTANDDEVELOPINGAMECHANICALSTIMULATIONMODELOFBMSCSINVITROUSINGAMULTICHANNELCELLSTRAINLOADINGSYSTEMTHEC57BL／6JBMSCSMICEWEREDIVIDEDINTOBLANKCONTR01GROUPSTRAINGROUPANDINHIBITORGROUPSB203580AP38MAPKSIGNALPATHWAYINHIBITORSTRAINLOADINGMECHANICALSTIMULATION，05HZ，O8％，2TIMESADAY30MINEACHTIME，BYTHEMULTICHANNELCELLSTRAINLOADINGSYSTEMTHENHARVESTBMSCSCELLSON1D3DAND5D，RESPECTIVELYREALTIMEPCRDETECTTHEEXPRESSIONCHANGESOFTHEALPCOLI，OCNANDOSTERIX；WESTERNBLOTTINGDETECTOFOSTERIXPROTEINANDPP38MAPKPROTEINAFTERAFFECTINGBYINTERMITTENTSTRETCHINGFORCEINHIBITTEDP38MAPKSIGNALPATHWAYBYSB203580，THENWESTEMBLOTTINGDETECTIONOFOSTERIXPROTEINANDPP38嗄APKPROTEIN；REALTIMEPCRDETECTTHEEXPRESSIONCHANGESOFTHEALPCOLI0CNANDOSTERIXKNOCKINGDOWNTHEGENEOFOSTERIXOFMOUSEBYSIIⅢA，DETECTINGTHEEXPRESSIONOFTHEPROTEINOFOSTERIXBYWESTEMBLOTTING，REALTIMEPCRFORTHEALP’COLI，OCNMRNA

簡(jiǎn)介：研究目的了解構(gòu)建組織工程骨和組織工程骨膜過(guò)程中，人胚骨膜來(lái)源成骨細(xì)胞與生物衍生支架材料相互作用的分子生物學(xué)機(jī)制以及成骨細(xì)胞重要基因表達(dá)的變化，從基因水平預(yù)測(cè)骨組織工程代用品的生物安全性及有效性。方法選用人胚骨膜來(lái)源成骨細(xì)胞為種子細(xì)胞，接種于經(jīng)過(guò)脫蛋白、脫細(xì)胞處理的生物衍生支架材料上，分別培養(yǎng)2、4、6、8和10天。提取總RNA，經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，采用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)目的基因Ⅰ型膠原COLI，骨鈣素OSTEOCALCIN，OC，成骨細(xì)胞特異轉(zhuǎn)錄因子CBFA1，成骨細(xì)胞特異基因OSTERIX以及整合素Α5Β1INTEGRINΑ5Β1進(jìn)行擴(kuò)增。在聚苯乙烯培養(yǎng)瓶中單純培養(yǎng)的成骨細(xì)胞作為對(duì)照組，在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行同樣的標(biāo)本處理。結(jié)果①組織工程骨和單純培養(yǎng)的成骨細(xì)胞CBFA1的表達(dá)隨培養(yǎng)時(shí)間逐漸降低，其中2天組與10組，8天組與4、6、10天組比較，P＜005。組織工程骨膜組在培養(yǎng)中期CBFA1表達(dá)降低，其中2天組與4、6、8天組比較，10天組與4天組及8天組比較，P＜005。培養(yǎng)末期，組織工程骨CBFA1表達(dá)明顯高于生物膜組和對(duì)照組，P＜005。②組織工程骨及單純培養(yǎng)中OSTERIX表達(dá)的變化與CBFA1一致。組織工程骨膜中OSTERIX的表達(dá)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高。培養(yǎng)早期和末期，組織工程骨OSTERIX的表達(dá)均高于對(duì)照組，P＜005。③COLI在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)隨時(shí)間均出現(xiàn)相類似的，較大的起伏變化。對(duì)照組表達(dá)則始終保持穩(wěn)定。④在2到6天中骨鈣素表達(dá)先下降，后回升。在培養(yǎng)末期，組織工程骨膜組骨鈣素表達(dá)升高，組織工程骨變化不明顯，對(duì)照組卻出現(xiàn)明顯的表達(dá)下調(diào)。⑤培養(yǎng)早期INTEGRINΑ5Β1表達(dá)呈陰性，INTEGRINΒ1組織工程骨中的表達(dá)略高于組織工程骨膜，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差別僅存在于2天組和6天組。對(duì)照組中，INTEGRINΒ1穩(wěn)定，各時(shí)間段比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論①成骨細(xì)胞與生物衍生材料結(jié)合后，重要基因可持續(xù)正常表達(dá)。②組織工程骨中，成骨細(xì)胞CBFA1與OSTERIX表達(dá)高于組織工程骨膜組和對(duì)照組，而且兩個(gè)基因的變化一致，提示生物衍生骨作為支架材料，在保持成骨細(xì)胞性狀，誘導(dǎo)及促進(jìn)成骨細(xì)胞分化方面有明顯優(yōu)越性。③成骨細(xì)胞與生物衍生材料結(jié)合后，以脈沖式產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)，提示生物衍生材料不僅對(duì)細(xì)胞順利進(jìn)入增殖狀態(tài)沒(méi)有影響，而且為細(xì)胞增殖提供廣闊而有效的空間。成骨細(xì)胞最終可以良好分化，充分發(fā)揮成骨功能。④生物衍生材料有利于成骨細(xì)胞黏附，但纖維連接蛋白并非必需的蛋白質(zhì)。

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簡(jiǎn)介：1骨復(fù)活湯對(duì)激素性股骨頭壞死血液流變學(xué)及脂代謝的影響目的探討SANFH的發(fā)病機(jī)制及骨復(fù)活湯對(duì)SANFH血液流變學(xué)及脂代謝的影響。方法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為四組，每組8只，分別為對(duì)照組、模型組、骨復(fù)活湯低劑量組15GKG1及骨復(fù)活湯高劑量組30GKG1。每周兩次臀部肌肉注射醋酸潑泥松75MGKG，正常對(duì)照組每周兩次注射等量生理鹽水，骨復(fù)活湯組同模型組一樣，用藥同時(shí)每日給予骨復(fù)活湯灌胃給藥，為了預(yù)防感染所有動(dòng)物每周兩次肌注青霉素5104單位只，共注射6周。每周稱體重1次，觀察動(dòng)物皮毛、活動(dòng)情況。末次給藥后心臟取血，測(cè)定全血粘度高切200S1，低切40S1，血漿粘度和紅細(xì)胞壓積。末次給藥后耳中央動(dòng)脈取血分離血清，測(cè)定血清總膽固醇和甘油三酯的含量。組織切片進(jìn)行光鏡觀察及透射電鏡觀察。并進(jìn)行骨復(fù)活湯小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)。四組家兔血液流變學(xué)測(cè)定、血脂測(cè)定資料用T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，四組家兔體重、股骨頭空骨陷窩率比較，經(jīng)SAS統(tǒng)計(jì)軟件做正態(tài)性檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)、方差分析、Q檢驗(yàn)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差X±S表示。結(jié)果一般形態(tài)觀察在試驗(yàn)期內(nèi)，對(duì)照組家兔體重逐漸增加，病理模型組家兔體重逐漸下降，消瘦，皮下脂肪顯著減少，骨復(fù)活湯組15GKG1，30GKG1家兔體重均略有下降，動(dòng)物狀態(tài)均明顯較病理模型組家兔好，6周后，對(duì)照組、骨復(fù)活湯組15GKG1，30GKG1家兔與病理模型組家兔體重比較，有顯著性差異P＜005，對(duì)照組、骨復(fù)活湯組15GKG1，30GKG1家兔體重相互比較，無(wú)顯著性差異P＞005。血液流變學(xué)檢測(cè)結(jié)果模型組家兔全血低切粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積均較正常對(duì)照組家兔升高，有顯著性差異P＜001，骨復(fù)活湯組15GKG1，30GKG1家兔全血低切粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積均較病理模型組家兔降低，有顯著性差異P＜005或P＜001。血脂測(cè)定結(jié)果模型組家兔血清總膽固醇和甘油三酯水平均較正常對(duì)照組家兔升高，有顯著性差異P＜001，骨復(fù)活湯組15GKG1，30GKG1家兔血清總膽固醇和甘油三酯均較病理模型組家兔降低，有顯著性差異P＜005或P＜001。HE切片及透射電鏡觀察結(jié)果對(duì)照組股骨頭軟骨下區(qū)軟骨細(xì)胞排列整齊，小血管豐富，骨小梁排列整齊，骨髓內(nèi)組織緊密，軟骨下區(qū)骨髓內(nèi)脂肪細(xì)胞均勻分布，骨板內(nèi)僅見(jiàn)極個(gè)別空骨陷窩；病理模型組家兔股骨頭大量空骨陷窩，髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞明顯增多增大，骨髓內(nèi)出現(xiàn)灶狀出血，透射電鏡見(jiàn)骨細(xì)胞核膜破裂，核濃縮，染色質(zhì)溶解，胞漿內(nèi)可見(jiàn)脂滴，異常肥大的脂肪細(xì)胞壓迫小靜脈，使受壓管腔驟然變窄，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)較大的低電子密度脂滴；骨復(fù)活湯15GKG1，30GKG1組家兔股骨頭空骨陷窩數(shù)均較少、髓腔脂肪細(xì)胞均較少較小，骨小梁稀疏、未見(jiàn)斷裂。對(duì)照組家兔股骨頭空骨陷窩率1287±236，模型組家兔股骨頭空骨陷窩率2175±292，骨復(fù)活湯低劑量組15GKG1家兔股骨頭空骨陷窩率1662±239，骨復(fù)活湯高劑量組30GKG1家兔股骨頭空骨陷窩率1587±188，方差分析F1867，P00001，四組間有顯著性差異，Q檢驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M家兔與對(duì)照組及骨復(fù)活湯組15GKG1，30GKG1家兔股骨頭空骨陷窩率比較，有顯著性差異P＜005，骨復(fù)活湯低劑量組與高劑量組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，無(wú)顯著性差異P＞005，骨復(fù)活湯組15GKG1，30GKG1家兔與對(duì)照組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，有顯著性差異P＜005。骨復(fù)活湯小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)預(yù)試無(wú)法測(cè)出LD50，故進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)，給藥后動(dòng)物在7日內(nèi)動(dòng)物一般狀態(tài)良好，毛色光滑、體重增長(zhǎng)、飲食及活動(dòng)未見(jiàn)異常，無(wú)一死亡，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。其小鼠灌胃給藥最大藥量為816G生藥日，相當(dāng)于成人臨床用量的255倍臨床成人70KG，用量228G生藥日。結(jié)論大劑量激素引起脂肪代謝紊亂，導(dǎo)致高脂血癥、使骨組織脂代謝紊亂，股骨頭內(nèi)骨細(xì)胞脂肪變性、壞死；引起血液高粘滯狀態(tài)，靜脈內(nèi)瘀滯，股骨頭骨內(nèi)壓升高，骨組織缺血、壞死。骨復(fù)活湯能夠改善家兔SANFH的血流變及脂代謝。而且毒性小。2骨復(fù)活湯對(duì)激素性股骨頭壞死股骨頭局部細(xì)胞凋亡的影響目的探討SANFH的發(fā)病機(jī)制及骨復(fù)活湯對(duì)SANFH股骨頭局部細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果空骨陷窩情況正常對(duì)照組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞核著色均勻，骨陷窩內(nèi)骨細(xì)胞形態(tài)正常，骨髓內(nèi)骨細(xì)胞分布適中；模型組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞核不著色，形成大量空骨陷窩；骨復(fù)活湯組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞變性，核變扁偏于一側(cè)，骨細(xì)胞核部分著色，骨細(xì)胞分布較對(duì)照組少，空骨陷窩少；仙靈骨葆組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞變性，核變扁偏于一側(cè)，骨細(xì)胞核少部分著色，空骨陷窩少，骨細(xì)胞分布較骨復(fù)活湯組少。正常對(duì)照組家兔空骨陷窩率1201±213，模型組家兔股骨頭空骨陷窩率2603±454，骨復(fù)活湯組空骨陷窩率1650±256，仙靈骨葆組空骨陷窩率1751±298，方差分析F2695，P00001，四組間有顯著性差異，Q檢驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M家兔與對(duì)照組、骨復(fù)活湯組15GKG1及仙靈骨葆組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，有顯著性差異P＜005，骨復(fù)活湯組15GKG1家兔與仙靈骨葆組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，無(wú)顯著性差異P＞005，骨復(fù)活湯組15GKG1、仙靈骨葆組家兔與對(duì)照組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，有顯著性差異P＜005。細(xì)胞凋亡情況骨細(xì)胞凋亡正常對(duì)照組的標(biāo)本上的骨細(xì)胞凋亡極少，骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為310±041；在病理模型組的骨標(biāo)本上，可見(jiàn)骨細(xì)胞核中有棕黃色顆粒的陽(yáng)性細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞，骨髓組織內(nèi)出現(xiàn)大量凋亡的骨細(xì)胞，其骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為3041±491；骨復(fù)活湯組15GKG1骨細(xì)胞凋亡較病理模型組少，骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為2193±227；仙靈骨葆組的標(biāo)本上，骨細(xì)胞凋亡較病理模型組少，骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為2328±247；結(jié)論家兔SANFH病程中，骨壞死是通過(guò)激素誘導(dǎo)骨細(xì)胞及成骨細(xì)胞的凋亡和壞死共同作用的結(jié)果方式進(jìn)行的；骨復(fù)活湯在改善家兔SANFH的骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞凋亡及壞死方面有一定作用。3骨復(fù)活湯對(duì)SANFH股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFMRNA表達(dá)的影響目的探討骨復(fù)活湯對(duì)SANFH股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFMRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯微鏡下觀察VEGFMRNA表達(dá)分布的情況，股骨頭標(biāo)本在400倍光鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野。AEC染色的陽(yáng)性表達(dá)為紅色，以血管瘤陽(yáng)性對(duì)照片中血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中出現(xiàn)的紅色顆粒的染色程度作為VEGFMRNA表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)。淡紅色為，深紅色為，介于兩者之間為，陰性為一。正常的股骨頭組織的高倍鏡下，可以看到在軟骨下微小血竇和骨小梁髓腔內(nèi)的微小血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿有弱陽(yáng)性表達(dá)；模型組由于微小血管受到破壞，血管內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量減少，微小血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)較少；骨復(fù)活湯組微小血管內(nèi)皮細(xì)胞的VEGFMRNA較高陽(yáng)性表達(dá)，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量增加，微小血管數(shù)量增加；仙靈骨葆組微小血管內(nèi)皮細(xì)胞的VEGFMRNA陽(yáng)性表達(dá)，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量增加，微小血管數(shù)量增加。結(jié)論家兔SANFH病程中，激素對(duì)于股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFMRNA表達(dá)有抑制作用；骨復(fù)活湯藥物能夠促進(jìn)股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性。4骨復(fù)活湯和髓芯減壓術(shù)治療激素性早期股骨頭壞死的臨床研究目的觀察骨復(fù)活湯和髓芯減壓術(shù)與仙靈骨葆和髓芯減壓術(shù)治療SANFH國(guó)際分期法Ⅰ、Ⅱ期的臨床療效比較。結(jié)果療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志所列標(biāo)準(zhǔn)及臨床經(jīng)驗(yàn)制定。治愈疼痛完全消失，活動(dòng)后無(wú)疼痛，臨床檢查功能正常，X線片及CT顯示骨質(zhì)復(fù)活，骨小梁連續(xù)完整，密度均勻。MRI的T1加權(quán)像低密度區(qū)恢復(fù)正常。顯效疼痛完全消失，活動(dòng)后無(wú)疼痛，臨床檢查功能正常，X線片及CT顯示骨質(zhì)復(fù)活，有明顯的骨修復(fù)，壞死區(qū)明顯減少，骨小梁排列整齊規(guī)則，MRI的T1加權(quán)像低密度區(qū)明顯減小。結(jié)論SANFH主要系長(zhǎng)期使用激素藥物，或大量使用，或間斷一次量過(guò)大使用激素藥物所致。SANFH的早期組織學(xué)改變?yōu)榭展窍莞C增多，骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞增生、肥大及間質(zhì)水腫，骨細(xì)胞進(jìn)一步壞死，出現(xiàn)骨小梁和骨髓壞死，并開(kāi)始部分壞死組織修復(fù)；骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞增生、肥大及間質(zhì)水腫是造成股骨頭內(nèi)骨內(nèi)壓升高的主要原因，是引起SANFH的主要因素之一。髓芯減壓術(shù)治療早期SANFH的療效滿意。骨復(fù)活湯和髓芯減壓術(shù)優(yōu)于仙靈骨葆和髓芯減壓術(shù)治療成人早期SANFH的療效；越早期發(fā)現(xiàn)治療效果越好，早期診斷、早期治療對(duì)本病的療效至關(guān)重要。MRI是目前診斷早期股骨頭缺血壞死最敏感的方法。

簡(jiǎn)介：瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文電穿孔介導(dǎo)的基因治療兔下頜骨牽引成骨模型建立與鑒定姓名李盛華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師廖毅吳國(guó)平20090401瀘州醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文下頜骨的肌肉，暴露下頜骨。于下頜骨頦孔處，用微型電動(dòng)鉆截開(kāi)下頜骨，于下頜骨斷開(kāi)處安放2CM牽引器，固定，逐層縫合組織。于術(shù)后3天開(kāi)始牽引，每天08MM，連續(xù)牽引LO天后，將兔隨機(jī)分為3組A組質(zhì)粒電脈沖組，B組質(zhì)粒組，C組生理鹽水組。A、C組均施加電脈沖刺激。B組只注射重組質(zhì)粒而不施加電刺激。各組分別于注射后34時(shí)、L天、3天、7天、14天處死動(dòng)物，切取牽引區(qū)組織約04CMX04CM大小，立即行冰凍切片檢查，用熒光顯微鏡觀察GFP蛋白表達(dá)情況，從而檢測(cè)外源基因的表達(dá)。檢測(cè)兔血清肝功能指標(biāo)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶ALT、天FJ氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST和腎功能指標(biāo)尿素氮BUN、肌酐SCR和心、肝、腎組織學(xué)檢查。結(jié)果A組轉(zhuǎn)染新西蘭大白兔，34時(shí)可觀察到綠色熒光蛋白的表達(dá)，L天時(shí)增強(qiáng)，3天時(shí)表達(dá)最強(qiáng)，其后開(kāi)始逐漸下降，7天后表達(dá)減少，14天仍可觀察到微弱熒光。B組的表達(dá)時(shí)限與A組相同，但各時(shí)相點(diǎn)的表達(dá)強(qiáng)度明顯弱于A組，C組在各時(shí)間段均未觀察到綠色熒光蛋白的表達(dá)。3組肝腎功能指標(biāo)兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05。結(jié)論電穿孔介導(dǎo)的帶有熒光標(biāo)記重組質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染能夠在兔下頜骨牽引區(qū)組織內(nèi)表達(dá)，并且電穿孔能明顯提高重組質(zhì)粒的體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率，說(shuō)明電穿孔介導(dǎo)的重組質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔下頜骨牽引成骨的動(dòng)物模型是可行的，用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是安全的。關(guān)鍵詞電穿孔，基因治療，牽引成骨，兔，動(dòng)物模型4

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多三七總皂苷干預(yù)兔酒精性股骨頭缺血性壞死骨組織粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的應(yīng)用水溶性殼聚糖衍生物NSC為骨靶向載體，合成蛇床子素骨靶向新型化合物NSCOST觀察NSCOST對(duì)大鼠體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞OSTEOBLAST，OB的增殖及骨保護(hù)素OPG、核因子ΚB受體活化因子配基RANKL表達(dá)的影響，觀察NSCOST對(duì)破骨細(xì)胞OSTCOCLAST，OC數(shù)量及骨吸收功能的影響，初步探討其作用機(jī)制。方法①通過(guò)物理包埋、綜合透析等方法，制備蛇床子素骨靶向藥物。②取新生大鼠顱蓋骨進(jìn)行OB分離培養(yǎng)。培養(yǎng)7D后采用堿性磷酸酶ALP染色鑒定OB，培養(yǎng)14D后采用茜素紅染色法鑒定OB隨機(jī)將OB分為5組，即空白對(duì)照組及終濃度為107MMOLL、106MMOLL、105MMOLL、104MMOLLNSCOST組，分別加入不同濃度的NSCOST作用不同時(shí)間，用MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖情況。不同濃度的NSCOST作用成骨細(xì)胞7D，采用ELISA法檢測(cè)藥物成骨細(xì)胞OPG、RANKL的表達(dá)。③取新生乳大鼠股骨分離OC分離培養(yǎng)。分組及干預(yù)方法同前，培養(yǎng)7D后采用抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色鑒定破骨細(xì)胞并進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)；利用甲苯胺藍(lán)對(duì)骨吸收陷窩染色并在圖像分析儀上測(cè)定骨吸收陷窩的面積。結(jié)果①本研究成功合成了具有殼聚糖衍生物結(jié)構(gòu)的N辛基O磺?；鶜ぞ厶荖OSC，并成功制備了NSCOST。②體外分離培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型成骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)及生物學(xué)活性，堿性磷酸酶、茜素紅染色均呈陽(yáng)性結(jié)果；作用24H、48H、72H終濃度為105MMOLLNSCOST可促進(jìn)OB增殖P＜005，作用72H，終濃度為106MMOL可促進(jìn)OB增殖P＜005；終濃度為104MMOLLNSCOST具有明顯抑制OB增殖的作用P＜001。終濃度為106MMOL和105MMOLL組促進(jìn)成骨細(xì)胞OPG的表達(dá)、抑制RANKL的表達(dá)；終濃度為106MMOLL、105MMOLL組可顯著上調(diào)OPGRANKL的比值P＜001。③分離培養(yǎng)的細(xì)胞與OC相似，TRAP染色可見(jiàn)胞漿呈酒紅色；加藥培養(yǎng)48H，105MMOLL、104MMOLL組破骨細(xì)胞數(shù)量低于空白組P＜005，106MMOLL、105MMOLL、104MMOLL組骨吸收陷窩面積低于空白組P＜00596H時(shí)，不同濃度的NSCOST組破骨細(xì)胞和骨陷窩面積均低于空白對(duì)照組P＜005，P＜O01，106MMOLL、105MMOLL、104MMOL組組間骨吸收陷窩面積差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。結(jié)論①本研究以水溶性殼聚糖衍生物NSC為骨靶向載體，成功制備并表征了蛇床子素殼聚糖衍生物膠束，其具有較好的水溶性，有利于順利達(dá)到藥物的有效治療濃度及治療部位；②適當(dāng)濃度的NSCOST可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖及OPG的表達(dá)，抑制RANKL的分泌，同時(shí)能降低破骨細(xì)胞的數(shù)量，減少骨吸收陷窩的面積，從而達(dá)到抗骨質(zhì)疏松的目的，可為研發(fā)靶向選擇性高、局部作用強(qiáng)的新型抗骨質(zhì)疏松藥提供有益參考。

簡(jiǎn)介：本研究通過(guò)切除大鼠雙側(cè)卵巢建立骨質(zhì)疏松的動(dòng)物模型用骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)方法測(cè)量頜骨、脛骨骨小梁結(jié)構(gòu)的變化了解頜骨與脛骨骨結(jié)構(gòu)變化的關(guān)系以探討骨質(zhì)疏松時(shí)頜骨與全身骨的確切關(guān)系探討頜骨骨質(zhì)疏松的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)為頜骨骨質(zhì)疏松的防治牙槽外科及種植外科的發(fā)展提供理論依據(jù)1大鼠去勢(shì)后引起了頜骨和脛骨的骨質(zhì)疏松化改變2大鼠去勢(shì)后近期頜骨和脛骨的骨量減少是不一致的頜骨的骨質(zhì)疏松滯后于脛骨3大鼠去勢(shì)后遠(yuǎn)期頜骨和脛骨的骨量減少趨向于一致4大鼠去勢(shì)后骨計(jì)量學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥患者的全身骨量喪失與頜骨骨量喪失呈相關(guān)性但不同步

簡(jiǎn)介：目的探討針刺、電針和溫針治療對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎KOA軟骨基質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用，為針灸臨床治療KOA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法通過(guò)兔膝關(guān)節(jié)注射木瓜蛋白酶制造KOA模型，七天后，藥物、針刺、電針和溫針介入治療，6周后，觀察各組關(guān)節(jié)軟骨蛋白多糖、Ⅱ型膠元、MMP1、TIMP1、MMP1TIMP1之比、IGF1和TGFΒ1的改變。結(jié)果模型組關(guān)節(jié)軟骨蛋白多糖和Ⅱ型膠元破壞，含量減少，出現(xiàn)骨性關(guān)節(jié)炎特征性改變；同時(shí)出現(xiàn)MMP1、TIMP1、MMP1IMP1、IGF1和TGFΒ1反應(yīng)性上調(diào)，模型達(dá)到了模擬關(guān)節(jié)軟骨損傷過(guò)程中既破壞加強(qiáng)，又反應(yīng)性的修復(fù)加強(qiáng)的病理特點(diǎn)，造模成功。用針刺、電針和溫針治療KOA模型動(dòng)物，電針和溫針治療大部分起到了促進(jìn)基質(zhì)合成和合理分布，降低MMP1表達(dá)，調(diào)節(jié)TIMP1含量、減小MMP1TIMP1比例，良性調(diào)整IGF1和TGFΒ1表達(dá)的作用，而單純針刺僅表現(xiàn)出了這種調(diào)節(jié)表達(dá)的趨勢(shì)。不同針?lè)ㄖ委熗瑫r(shí)表現(xiàn)出與藥物對(duì)照組相似的療效趨勢(shì)。結(jié)論針刺、電針和溫針能不同程度地良性調(diào)節(jié)軟骨相關(guān)生化指標(biāo)的表達(dá)，促進(jìn)病損軟骨的適度修復(fù)，減輕關(guān)節(jié)病損程度，為臨床治療提供了基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：湖北中醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文聚肌胞穴位注射配合中藥內(nèi)服治療扁平疣臨床應(yīng)用研究姓名陳喬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合臨床指導(dǎo)教師王愛(ài)國(guó)20090426總有效率優(yōu)于對(duì)照組。2兩組痊愈率比較治療組51例，痊愈31例，未愈20例，痊愈率為6078％；對(duì)照組50例，痊愈21例，未愈29例，痊愈率為4200％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組痊愈率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05，提示治療組痊愈率與對(duì)照組相當(dāng)。3兩組復(fù)發(fā)率比較治療組51例，隨訪50例，1例脫失，復(fù)發(fā)9例，未復(fù)發(fā)41例，復(fù)發(fā)率為18OO％；對(duì)照組50例，隨訪49例，1例脫失，復(fù)發(fā)19例，未復(fù)發(fā)30例，復(fù)發(fā)率為3878％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組復(fù)發(fā)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05，提示治療組比對(duì)照組更能有效控制復(fù)發(fā)率。結(jié)論本課題采取對(duì)照比較的方式，以聚肌胞穴位注射配合中藥?kù)铕鄿珒?nèi)服為治療組，聚肌胞肌肉注射配合胸腺肽腸溶片口服為對(duì)照組。分別觀察兩組于治療4周和8周后的療效情況，12周后觀察兩組的復(fù)發(fā)情況。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組患者痊愈率相當(dāng)，但其總有效率高于對(duì)照組，復(fù)發(fā)率低于對(duì)照組。說(shuō)明聚肌胞穴位注射配合中藥內(nèi)服能有效的治療扁平疣，并能控制扁平疣的復(fù)發(fā)。關(guān)鍵詞穴位注射聚肌胞祛疣湯扁平疣臨床應(yīng)用研究

簡(jiǎn)介：目的比較應(yīng)用Ⅳ型鑲嵌式骨外固定器行骨段轉(zhuǎn)移術(shù)與鋼板內(nèi)固定結(jié)合骨移植術(shù)治療伴有肢體短縮的脛骨骨不連的臨床療效，為臨床合理選擇治療方法提供依據(jù)。方法回顧性研究2001年10月以來(lái)手術(shù)治療的50例脛骨缺損型骨不連患者，其中鑲嵌式骨外固定器行骨骨段轉(zhuǎn)移術(shù)治療30例，男21例，女9例，年齡5～48歲，平均274歲；行鋼板螺絲釘內(nèi)固定結(jié)合骨移植術(shù)治療20例，男15例，女5例，年齡7～46歲，平均312歲。結(jié)果全部病人均獲隨訪。1鑲嵌式骨外固定器行骨段轉(zhuǎn)移術(shù)病例組術(shù)后隨診9～39個(gè)月，骨不連接愈合時(shí)間平均664～13個(gè)月，愈合率為100％，肢體長(zhǎng)度恢復(fù)率為100％。骨折端成角2例，均小于8°；針孔感染者5例，共8處；無(wú)骨髓炎及神經(jīng)血管損傷。2鋼板螺絲釘內(nèi)固定結(jié)合骨移植術(shù)病例組術(shù)后隨診10～44個(gè)月，骨不連接愈合時(shí)間平均836～18個(gè)月，骨愈合15例，愈合率為75％，7例肢體長(zhǎng)度仍有短縮1～2CM，肢體長(zhǎng)度恢復(fù)率為65％。1例植骨吸收感染；2例術(shù)后隨訪1年時(shí)X線檢查示骨不連未愈合，鋼板斷裂1例，螺釘松動(dòng)1例；無(wú)神經(jīng)血管損傷。結(jié)論鑲嵌式骨外固定器行骨段轉(zhuǎn)移術(shù)與鋼板螺絲釘內(nèi)固定結(jié)合骨移植術(shù)均是治療伴有肢體短縮的脛骨骨不連的有效方法，但前者在愈合時(shí)間、愈合率與肢體長(zhǎng)度恢復(fù)率三個(gè)方面均優(yōu)于后者。

簡(jiǎn)介：研究背景和目的磷酸肌酸PCR作為外源性能量物質(zhì)，可為ATP循環(huán)提供磷酸基團(tuán)，促進(jìn)細(xì)胞能量代謝。由于現(xiàn)有的研究仍對(duì)PCR是否對(duì)細(xì)胞線粒體的能量代謝及其氧化磷酸化途徑產(chǎn)生影響尚不清楚，本研究目的為探討PCR對(duì)脂多糖LPS誘導(dǎo)的人靜脈細(xì)胞HUVECS及其細(xì)胞線粒體氧化磷酸化途徑的調(diào)節(jié)作用。方法實(shí)驗(yàn)分為5組1空白對(duì)照組正常培養(yǎng)的HUVECS細(xì)胞2LPS組1ΜGML的LPS作用24H3PCRLPS組分別用5MM、10MM、20MM的PCR預(yù)孵育HUVECS6H后加入1ΜGMLLPS作用24H。分別使用1MTT法實(shí)驗(yàn)測(cè)定HUVECS細(xì)胞的生存率2光鏡和電鏡分別觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化3流式AVPI雙染法測(cè)定凋亡細(xì)胞的數(shù)目4流式FLUO3法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化5流式DCFHDA熒光染色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS的變化6流式JC1法測(cè)定細(xì)胞線粒體膜電位的變化7WESTERN法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)CASPASE3、CASPASE9、BCL2、BAX、CYTC蛋白表達(dá)水平變化8紫外分光光度法測(cè)定線粒體呼吸鏈復(fù)合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活性9紫外分光光度法測(cè)定線粒體呼吸控制率RCR、磷氧比值（PO值）和ATP生成率的變化10紫外分光光度法測(cè)定線粒體膜孔道MPTP的開(kāi)放程度11紫外分光光度法測(cè)定細(xì)胞線粒體內(nèi)肌酸激酶CKMT活性的測(cè)定。結(jié)果PCR能夠在一定程度上提高LPS誘導(dǎo)的HUVECS凋亡細(xì)胞的生存率，通過(guò)電鏡可以觀察到PCR可以提高細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，防止凋亡細(xì)胞核質(zhì)的過(guò)度邊緣化，并且可以緩解凋亡細(xì)胞線粒體的不可逆性腫脹。PCR還可以有效減少凋亡細(xì)胞的數(shù)量，尤其是早期凋亡細(xì)胞的數(shù)量。PCR能通過(guò)降低凋亡細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，降低凋亡細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，提高凋亡細(xì)胞的線粒體膜電位水平減少凋亡細(xì)胞內(nèi)CASPASE3，CASPASE9蛋白的表達(dá)，增加線粒體抗凋亡蛋白BCL2的表達(dá)，減少線粒體促凋亡蛋白BAX的表達(dá)通過(guò)調(diào)控MPTP的過(guò)度開(kāi)放，防止線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C外溢，不同程度的提高線粒體呼吸鏈復(fù)合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活性，其中對(duì)復(fù)合酶Ⅱ活性的影響程度要大于復(fù)合酶Ⅰ。提高細(xì)胞線粒體的氧化磷酸化水平（呼吸控制率、PO比值、ATP生成率），其中PCR對(duì)以琥珀酸為底物的呼吸控制率和PO比值的改善程度大于以蘋果酸和谷氨酸為底物的情況。并且，PCR能夠增強(qiáng)細(xì)胞線粒體內(nèi)磷酸激酶CKMT的活性來(lái)對(duì)抗LPS誘導(dǎo)的HUVECS細(xì)胞凋亡。結(jié)論磷酸肌酸可能通過(guò)穩(wěn)定細(xì)胞整體能量代謝，尤其是對(duì)細(xì)胞線粒體呼吸鏈FAD途徑、ATP合成酶和線粒體肌酸激酶CKMT的顯著影響來(lái)對(duì)抗LPS誘導(dǎo)的HUVECS細(xì)胞凋亡提示磷酸肌酸可能通過(guò)保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起到治療作用。

簡(jiǎn)介：目的評(píng)價(jià)對(duì)比膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)單間室骨關(guān)節(jié)炎脛骨高位截骨HTO與單髁置換UKA療效。方法計(jì)算機(jī)檢索COCHRANE圖書館臨床對(duì)照試驗(yàn)資料庫(kù)、PUBMED、EMBASE、CBMDISC、CNKI、VIP、及臨床試驗(yàn)網(wǎng)站手工檢索相關(guān)專業(yè)雜志。系統(tǒng)、全面地收集膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)單間室骨關(guān)節(jié)炎脛骨高位截骨與單髁置換的臨床對(duì)照研究試驗(yàn)文章語(yǔ)種為英文及中文檢索時(shí)間截止2012年7月。由兩名研究者按COCHRANE系統(tǒng)評(píng)價(jià)方法獨(dú)立納入試驗(yàn)、提取資料、評(píng)價(jià)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)提取有效數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)。結(jié)果共納入8個(gè)臨床試驗(yàn)包含530例患者其中259例單髁置換271例脛骨高位截骨單髁置換平均年齡662歲5680歲平均隨訪441年脛骨高位截骨平均年齡608歲5378歲平均隨訪447年。單髁置換與脛骨高位截骨比較META分析結(jié)果單髁置換在術(shù)后關(guān)節(jié)功能優(yōu)良率方面高于脛骨高位截骨差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義RR23495％CI100548P005單髁置換較脛骨高位截骨術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生率較低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義RR04695CI024190P002雖然單髁置換較脛骨高位截骨在術(shù)后翻修率較低但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義RR07495CI036152P04。結(jié)論單髁置換及脛骨高位截骨均適合于膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)單間室骨關(guān)節(jié)炎的手術(shù)治療早期單髁置換較脛骨高位截骨術(shù)后關(guān)節(jié)功能較優(yōu)并發(fā)癥較少而兩者翻修率上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。鑒于本系統(tǒng)評(píng)價(jià)納入研究普遍質(zhì)量偏低上述結(jié)論仍需進(jìn)一步開(kāi)展設(shè)計(jì)合理、執(zhí)行嚴(yán)格、大樣本、多中心的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)以指導(dǎo)臨床實(shí)踐。

簡(jiǎn)介：目前深凍骨已商品化免疫排斥反應(yīng)罕見(jiàn)發(fā)生故該實(shí)驗(yàn)以凍干松質(zhì)骨作為基質(zhì)材料、轉(zhuǎn)染有血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞BMSC為種子細(xì)胞這樣既保持了骨組織優(yōu)良的空間結(jié)構(gòu)又提供了種子細(xì)胞和血管化的刺激因子希望能為骨缺損及缺血性骨病治療提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)1、兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)目的在體外進(jìn)行骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)和擴(kuò)增觀察其形態(tài)學(xué)特點(diǎn)為進(jìn)一步研究基因轉(zhuǎn)染對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化的影響和繪制生長(zhǎng)曲線加以比較奠定工作基礎(chǔ)方法貼壁法分離兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞37℃5％CO培養(yǎng)箱培養(yǎng)觀察原代及傳代細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育情況并繪制生長(zhǎng)曲線在礦化液中連續(xù)培養(yǎng)觀察其骨形成能力2、逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體的構(gòu)建目的構(gòu)建高效的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體為下一步實(shí)驗(yàn)作準(zhǔn)備方法將PT7BLUEHVEGF質(zhì)粒酶切獲得HVEGF基因片段構(gòu)建PCDNAHVEGF并用PA317細(xì)胞包裝32℃G418培養(yǎng)48H3、VEGF在兔BMSC內(nèi)的表達(dá)及其影響目的檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子HVEGF基因轉(zhuǎn)染兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞BMSC后目的基因表達(dá)情況及促血管生成作用為進(jìn)一步將其用于血管化組織工程骨構(gòu)建奠定基礎(chǔ)4、轉(zhuǎn)基因骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合凍干骨體內(nèi)成骨的實(shí)驗(yàn)研究目的將轉(zhuǎn)基因骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合凍干骨后植入自體新西蘭大白兔的肌袋內(nèi)觀察其體內(nèi)成骨的情況

簡(jiǎn)介：目的1建立兔肩袖損傷腱骨界面修復(fù)的動(dòng)物模型。2評(píng)價(jià)自固化磷酸鈣人工骨Ⅱ型CPCⅡ?qū)﹄旃墙缑嫘迯?fù)效果，探討其修復(fù)機(jī)制及其生物力學(xué)特性。3為臨床治療肩袖損傷提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1成年健康的家兔42只，體重318±032KG。用戊巴比妥鈉水溶液取耳緣靜脈注射行全身麻醉。在肩袖的岡上肌腱止點(diǎn)處行離斷后重建，作為家兔肩袖損傷腱骨修復(fù)模型。2組織形態(tài)學(xué)及免疫組化的觀察18只成年健康的家兔分為2組每組9只，取雙側(cè)肩袖共36肩。實(shí)驗(yàn)組術(shù)中在腱骨界面填塞CPCⅡ?qū)φ战M術(shù)中不填塞。應(yīng)用過(guò)量戊巴比妥鈉在術(shù)后2、4、8周，隨機(jī)分批處死兩組各3只，取出標(biāo)本。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理后光鏡觀察。3生物力學(xué)的測(cè)試24只成年健康的家兔分為2組每組12只取雙側(cè)肩袖，共48肩。實(shí)驗(yàn)組術(shù)中在腱骨界面填塞CPCⅡ?qū)φ战M術(shù)中不填塞。應(yīng)用過(guò)量戊巴比妥鈉在術(shù)后2、4、8周隨機(jī)分批處死兩組各4只，取出標(biāo)本。標(biāo)本裝入用塑料袋中，放入80℃冰箱保存。實(shí)驗(yàn)前解凍，將標(biāo)本固定在生物力學(xué)測(cè)試機(jī)上做拉伸試驗(yàn)，并記錄分析數(shù)據(jù)，多因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷。結(jié)果組織形態(tài)學(xué)及免疫組化的觀察術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組HE染色相似見(jiàn)腱骨界面寬度均較寬，界面主要由炎性肉芽組織為主，分布不均勻，腱骨細(xì)胞生長(zhǎng)較少見(jiàn)。實(shí)驗(yàn)組抗體染色呈陽(yáng)性染色較深，對(duì)照組染色較淺，染色不均。術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組HE染色見(jiàn)腱骨界面炎性細(xì)胞減少，成纖維細(xì)胞增多，炎性肉芽組織向腱性組織過(guò)渡。實(shí)驗(yàn)組腱骨界面連接較前更致密，對(duì)照組間隙寬度減小，也可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組抗體染色表達(dá)呈陽(yáng)性染色較深，對(duì)照組染色較淺。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組見(jiàn)腱骨界面成纖維細(xì)胞明顯增多，出現(xiàn)類似直接止點(diǎn)結(jié)構(gòu)，對(duì)照組以結(jié)締組織為主。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組BMP2抗體染色表達(dá)區(qū)域呈陽(yáng)性，染色均較淺，實(shí)驗(yàn)組染色更均勻有序。生物力學(xué)的測(cè)試肩袖腱骨界面的最大抗拉強(qiáng)度在術(shù)后2、4、8周實(shí)驗(yàn)組分別是5849±670N、7992±635N、11490±839N對(duì)照組分別是5034±821N、6548±399N、7729±536N。術(shù)后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在組間總體上腱骨界面的最大抗拉強(qiáng)度具有顯著性差異（P＜0001）。肩袖腱骨界面的剛度在術(shù)后2、4、8周實(shí)驗(yàn)組分別是2076±311NMM、2573±316NMM、3714±439NMM對(duì)照組分別是1858±242NMM、2224±238NMM、2467±336NMM。術(shù)后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組腱骨界面的剛度組間總體上具有顯著性差異P＜0001。結(jié)論1兔肩袖損傷腱骨修復(fù)模型可以作為研究CPCⅡ?qū)﹄旃墙缑嫘迯?fù)影響的實(shí)驗(yàn)研究模型。2CPCⅡ能夠在腱骨界面重建術(shù)后早期促進(jìn)形成類似直接止點(diǎn)的特有結(jié)構(gòu)。CPCⅡ能夠顯著提高腱骨界面的最大抗拉強(qiáng)度及其剛度，試驗(yàn)表明CPC復(fù)合RHBMP2對(duì)腱骨界面修復(fù)能起到一定的促進(jìn)作用。