MPA、MG132對不同PR表達卵巢癌細胞增殖、凋亡影響的實驗研究.pdf

1、目的：探討醋酸甲羥孕酮（medroxyprogesterone acetate, MPA）、蛋白酶體抑制劑(Z-LLL-CHO, MG132)單獨及聯(lián)合應用對不同PR表達卵巢癌細胞增殖、凋亡的影響及相關(guān)機制，為卵巢癌的臨床治療提供新的實驗依據(jù)。
　　方法：⑴不同濃度的MPA（0、1、20、50、100μmol/L）、MG132（0、1、2.5、5、10μmol/L）單獨干預24-72 h，分別于24 h、48 h、72 h采用CC

2、K8法檢測兩種細胞的增殖情況。⑵取呈對數(shù)生長的兩種細胞分為：空白對照組（0μmol/L）、MG132組(5μmol/L)、MPA組（100μmol/L）、MG132+MPA組（5+100μmol/L），均作用24 h：a、采用CCK8法檢測兩種細胞的增殖情況；b、倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學變化并攝片；c、采用AnnexinV-FITC/PI雙染法通過流式細胞儀檢測藥物作用前后細胞的凋亡情況；d、利用免疫組化法（Immunohistoch

3、emistry, IHC）檢測藥物作用前后PR的表達情況；e、利用免疫印跡法（Westeron blot, WB）檢測藥物作用前后孕激素受體亞型PRA、PRB的表達情況。
　　結(jié)果：①CCK8結(jié)果顯示：MPA組（不同濃度）的HO-8910細胞存活率（％）分別為：（作用24 h）100.00±5.47、101.65±5.24、86.52±0.89、77.38±0.94、63.05±3.60；（作用48 h）100.00±0.94、1

4、04.45±0.37、71.06±3.22、55.70±0.74、48.08±0.08；（作用72 h）100.00±0.38、105.52±2.15、58.63±0.21、43.30±0.57、29.43±0.39。MPA組（不同濃度）的SKOV3細胞存活率（%）分別為：（作用24 h）100.00±3.46、101.53±3.3、95.39±2.02、89.15±2.51、84.49±2.29；（作用48 h）100.00±2.70

5、、99.58±0.29、89.22±1.67、86.37±0.22、78.44±5.08；（作用72 h）100.00±3.59、103.22±6.12、87.21±3.32、78.68±3.30、65.56±0.79。20-100μmol/L的MPA對HO-8910細胞的增殖抑制作用明顯強于SKOV3細胞且細胞存活率均呈劑量-效應和處理時間-效應依賴性下降。MG132組（不同濃度）的HO-8910細胞的存活率（%）分別為：（作用24

6、h）100.00±1.30、98.73±1.09、83.29±0.43、71.36±3.10、66.54±8.33；（作用48 h）100±0.06、89.35±2.05、73.39±1.86、59.46±0.69、47.40±0.98；（作用72 h）100±2.70、79.67±2.80、54.72±3.56、48.42±0.20、34.90±0.25。MG132組（不同濃度）的SKOV3細胞的存活率（%）分別為：（作用24 h）1

7、00.00±4.58、94.39±4.33、86.12±3.18、75.73±2.57、61.41±1.11；（作用48 h）100.00±3.40、80.18±2.73、62.11±3.89、51.76±3.99、46.97±1.75；（作用72 h）100.00±0.35、62.86±8.79、62.86±8.79、43.39±2.10、37.36±0.36、29.18±1.62。1-10μmol/L的MG132對HO-8910細胞

8、和SKOV3細胞的增殖抑制作用相似且細胞存活率均呈劑量-效應和處理時間-效應依賴性下降。HO-8910細胞中，MG132和MPA聯(lián)合用藥組的細胞存活率（62.43%±3.56%）與單用MPA組的細胞存活率（63.05%±3.60%）相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）,但在SKOV3細胞中MG132和MPA聯(lián)合用藥組的細胞存活率（65.52%±1.52%）明顯低于單用MPA組的細胞存活率（84.49%±2.29%），差異有統(tǒng)計學意義（p

9、＜0.05）。②細胞形態(tài)學觀察：control組細胞呈典型的上皮樣細胞特征，以類橢圓形及長梭形為主，鋪路石樣生長，細胞排列規(guī)則緊湊；MG132組細胞數(shù)目減少，細胞間隙增大，視野內(nèi)見較多漂浮細胞，部分細胞體積變大，偽足細長，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡；MG132+MPA組細胞數(shù)目減少更明顯，視野內(nèi)見大量漂浮細胞，胞漿內(nèi)的空泡更多；兩者MPA組細胞形態(tài)存在明顯差異，HO-8910細胞MPA組細胞改變與MG132組細胞改變相似，而SKOV3細胞MPA組細

10、胞數(shù)量稍減少，細胞排列較緊湊，部分細胞伸出偽足，呈多角形，未見明顯漂浮細胞及胞漿內(nèi)空泡。③流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：HO-8910細胞中各組細胞凋亡率（%）：control組0.42±0.04、MG132組7.49±0.83、MPA組11.95±0.52、MG132+MPA組12.54±0.42；SKOV3細胞中各組細胞凋亡率（%）：control組0.64±0.06、MG132組7.29±0.41、MPA組6.37±0.54、MG132+M

11、PA組14.67±0.65；聯(lián)合用藥時， SKOV3細胞中， MG132+MPA組細胞凋亡率明顯大于單用MPA組（p＜0.05），但在HO-8910細胞中， MG132+MPA組凋亡率與單用MPA組相比，差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。④免疫組化法結(jié)果顯示：PR于胞核表達豐富，胞漿也可見表達，HO-8910細胞中PR高表達，SKOV3細胞中PR低表達。兩種細胞中MG132組、MG132+MPA組PR表達均高于control組（p＜0.

12、05），而MPA組PR表達與control組相比，差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。⑤免疫印跡法結(jié)果顯示：HO-8910、SKOV3細胞中PRB的表達明顯高于PRA。MG132組、MG132+MPA組PRB、PRA的表達均高于control組（p＜0.05），而MPA組PRA、PRB的表達與control組相比，差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　結(jié)論：⑴MPA對PR高表達細胞株HO-8910的增殖抑制及誘導凋亡作用明顯強于P