曲古抑菌素A對卵巢癌細(xì)胞分化、增殖的影響.pdf

1、研究背景
　　近年來，我國社區(qū)居民疾病譜發(fā)生顯著變化，惡性腫瘤的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。人類腫瘤是一組由多種因素引發(fā)的疾病，存在大量基因的突變或者異常激活。然而，僅僅以致癌基因和/或抑癌基因的改變，無法解釋腫瘤在發(fā)生發(fā)展過程中的所有現(xiàn)象，還涉及到表觀遺傳學(xué)的改變。表觀遺傳學(xué)是指基因表達(dá)在不改變DNA序列的情況下發(fā)生可遺傳的改變，比如 DNA甲基化、組蛋白修飾、microRNA等等。越來越多的研究表明，表觀遺傳改變也是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的主

2、要因素。其中，組蛋白修飾通過改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄活性而受到人們廣泛的關(guān)注。
　　組蛋白修飾是表觀遺傳調(diào)控的重要組成部分，組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HAT）和組蛋白去乙?；福℉DACs）活性的拮抗作用共同維持組蛋白乙?；揎椀钠胶?。在許多腫瘤中，組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HAT）和組蛋白去乙酰化酶（HDACs）活性之間的平衡發(fā)生了改變。而組蛋白去乙?；敢种苿┠軌蚰孓D(zhuǎn)HDACs的去乙?；饔?，提高組蛋白乙?；?，使與細(xì)胞分化、增殖抑制、

3、細(xì)胞周期阻滯相關(guān)的基因處于轉(zhuǎn)錄激活狀態(tài)，從而發(fā)揮腫瘤抑制作用。因此，組蛋白去乙?；敢种苿┦且活惡苡星熬暗目鼓[瘤藥物。目前已被FDA批準(zhǔn)用于治療癌癥的表觀遺傳藥物包括兩種DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMT）抑制劑和一個種去乙酰化酶（HDAC）抑制劑。曲古抑菌素 A(TSA)是近年來比較受關(guān)注的一種異羥肟酸型HDAC抑制劑。有研究表明，TSA能特異性抑制組蛋白去乙酰化酶的活性，發(fā)揮腫瘤抑制作用，但其相關(guān)機(jī)制仍不清楚。
　　研究目的

4、　　觀察曲古抑菌素A(TSA)對卵巢癌細(xì)胞分化、增殖的影響并初步探討其相關(guān)機(jī)制。
　　研究方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)分組
　　以卵巢癌上皮細(xì)胞系HO8910為研究對象，將細(xì)胞分為：對照組（0nM TSA）、100nM TSA實(shí)驗(yàn)組、200nM TSA實(shí)驗(yàn)組、400nM TSA實(shí)驗(yàn)組；
　　2、TSA對卵巢癌細(xì)胞分化影響觀察
　?。?）應(yīng)用倒置顯微鏡觀察對照組（0nM TSA）和200nM TSA實(shí)驗(yàn)組在24h、4

5、8、72h三個時間點(diǎn)的細(xì)胞形態(tài)，并對細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行評估；
　　（2）應(yīng)用Western blot檢測組蛋白H3乙?；恼w水平以及干性標(biāo)記（SOX2和OCT-4）和分化標(biāo)記FOXA2的蛋白表達(dá)水平；
　　3、TSA對卵巢癌細(xì)胞增殖影響觀察
　?。?）應(yīng)用MTT檢測法檢測TSA對卵巢癌細(xì)胞增殖率的影響，應(yīng)用EdU檢測法檢測TSA對卵巢癌細(xì)胞DNA合成能力的影響；
　?。?）應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測TSA對卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞周期

6、分布的影響；
　?。?）應(yīng)用Western blot檢測細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑p21Cip1和細(xì)胞周期蛋白cyclin D1的蛋白表達(dá)水平。
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　應(yīng)用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以(-x)±S表示，首先采用單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行多組間均數(shù)比較，如果組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)組與對照組的兩樣本均數(shù)比較。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，

7、p＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　1、與對照組相比，200nM TSA實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞在形態(tài)上發(fā)生明顯的改變，是一個從類圓形-星狀-梭形的形態(tài)轉(zhuǎn)變過程。
　　2、TSA以濃度依賴的方式顯著上調(diào)組蛋白H3乙酰化水平；TSA處理顯著下調(diào)SOX2和OCT-4的表達(dá)水平，上調(diào)FOXA2的表達(dá)水平。
　　3、與對照組相比，TSA以濃度和時間依賴方式明顯降低細(xì)胞的增殖率(均 p＜0.05)，抑制細(xì)胞DNA合成能力

8、。
　　4、TSA誘發(fā)細(xì)胞周期阻滯在G1期(p＜0.05)，其中，400nM TSA實(shí)驗(yàn)組G1期細(xì)胞比例高達(dá)87.43％（p＜0.01）；且伴隨p21cip1蛋白表達(dá)量的增加和cyclin D1表達(dá)水平的下降。
　　結(jié)論
　　1、曲古抑菌素A(TSA)可誘導(dǎo)卵巢癌HO8910細(xì)胞分化，并發(fā)生細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的轉(zhuǎn)變，可能與分化相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
　　2、TSA能抑制卵巢癌HO8910細(xì)胞的增殖能力，使細(xì)胞在G1/S