β-catenin-shRNA對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖性、致瘤性的影響.pdf

1、Effectontheproliferatingand■■■n●’otumoriRenlcityOl0VarlanCancercellstransfectedwithpcateninshRNAADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineSchoolofMedicineSoutheastUniversityJune5，20

2、10h埠■rrr‘lll‘10‘07‘『h●L●、_東南人學(xué)碩I：學(xué)位論文13cateninshRNA對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲性、致瘤性的影響中文摘要起源于卵巢表皮上皮的上皮性卵巢癌(epithelialovariancancer，EOC)約占卵巢癌的90％，是女性生殖器官常見腫瘤，其發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位，但死亡率卻占各類婦科腫瘤的首位且早期難以診斷。目前，卵巢癌的治療手段主要包括手術(shù)、化療、放療、免疫治療

3、、物理治療等，這些方法的基本思路是把腫瘤看作是一個(gè)均質(zhì)性整體，以減少腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，最大限度清除腫瘤病灶為目的。但是部分腫瘤細(xì)胞對(duì)化療、放療的抵抗從而造成腫瘤的復(fù)發(fā)是腫瘤治療的主要障礙。因此，探索卵巢癌發(fā)病機(jī)制，尋找其治療的新途徑，已成為進(jìn)一步提高卵巢癌患者生存率的關(guān)鍵。研究顯示，腫瘤組織中有極少數(shù)細(xì)胞具有干細(xì)胞特性，即能無限增生，對(duì)化療、放療具有抗性，是腫瘤發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素?，F(xiàn)已明確這些極少數(shù)細(xì)胞具有干細(xì)胞特性的腫瘤細(xì)胞

4、是腫瘤起始細(xì)胞(tumorinitialcells，TIC)或“癌起始細(xì)胞”(cancerinitiatingcells，CIC)，也稱之為腫瘤干細(xì)胞(tumorstemcells，TSC)或癌干細(xì)胞(cancerstemcells，csc)。研究還顯示，一些干細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路的異常激活在腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，比如Wnt、Hedgehog、Notch、HH／PTCH、NFKB等，其中經(jīng)典的Wnt／[3catenin信號(hào)通路，在多

5、種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。已知，在詎常細(xì)胞發(fā)育過程中，Wnt／13catenin(Wnt／p連環(huán)蛋白)信號(hào)就像一個(gè)開關(guān)，精密調(diào)節(jié)細(xì)胞命運(yùn)：該信號(hào)活化，細(xì)胞增賄、自我更新；該信號(hào)失活，則細(xì)胞分化。在正常成熟細(xì)胞，pcatenin多與細(xì)胞膜上的鈣粘蛋白(Ecadherin)結(jié)合，參與介導(dǎo)細(xì)胞間黏附，少部分游離的13catenin在胞質(zhì)與降解復(fù)合體(GSK3B、APC和Actin)結(jié)合，磷酸化后經(jīng)蛋白酶體途徑很快降解。因而在正常成熟

6、細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)13catenin維持在很低的水平，Wnt／13catenin信號(hào)途徑處于失活狀態(tài)。而在腫瘤細(xì)胞中，常由于鈣粘蛋白減少導(dǎo)致pcatenin含量增多，或是APC等降解復(fù)合體成分破壞或pcatenin自身突變，導(dǎo)致pcatenin降解被阻斷，從而使細(xì)胞質(zhì)中pcatenin增多集聚，并最終轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核內(nèi)，通過TCF／LEF啟動(dòng)下游靶基因包括cMyc、cyclinDl等的表達(dá)。在卵巢癌中也存在有pcatenin的高表達(dá)，因而，我們利用

7、RNAi的方法，來降低pcatenin在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)，并研究13catenin表達(dá)降低對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。本研究選擇人卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780細(xì)胞系作為研究對(duì)象。針對(duì)pcatenin編碼基因CTNNBl設(shè)計(jì)合成小發(fā)央RNA(smallhairpinRNA，shRNA)，并構(gòu)建真核shRNA表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染至A2780細(xì)胞，以期來降低13catenin表達(dá)水平，通過檢測(cè)細(xì)胞生物學(xué)特性改變，探討13catenin是否可作為卵巢癌