UCHL1對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、UCHL1，全稱為ubiquitincarboxyl-terminalhydrolaseL1，是一種去泛素化酶，也是泛素羧基末端酯酶家族的一員。UCHL1最初被發(fā)現(xiàn)表達(dá)于腦部組織及睪丸/卵巢，其中在神經(jīng)元中表達(dá)量甚至可以占到總蛋白的2％。UCHL1在腦組織中的低表達(dá)及一些特定位點(diǎn)的突變能導(dǎo)致阿爾茨海默氏病及帕金森癥等神經(jīng)退行性疾病。近年來(lái)越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)UCHL1在多種惡性腫瘤中有異常表達(dá)現(xiàn)象，并揭示了其在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用。然而

2、，UCHL1在不同腫瘤中的功能卻并不一致。在非小細(xì)胞肺癌、腎細(xì)胞癌等腫瘤中，UCHL1具有促進(jìn)腫瘤增殖和遷移的能力，被認(rèn)為是癌基因;而在乳腺癌、前列腺癌等腫瘤中，UCHL1卻抑制細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而具有抑癌基因的作用。然而在卵巢癌中，除了一篇文獻(xiàn)報(bào)道UCHL1基因啟動(dòng)子區(qū)存在一定程度的超甲基化外，有關(guān)其功能的研究卻未見(jiàn)報(bào)道。
　　 在本文的第一部分，我們發(fā)現(xiàn)通過(guò)shRNA干擾技術(shù)使UCHL1低表達(dá)后，兩個(gè)卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2

3、780及IGROV1的增殖能力增強(qiáng)，同時(shí)凋亡水平降低。雖然IGROV1-shUCHL1與其對(duì)照相比凋亡水平并未呈現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)顯著性差異，但同樣是凋亡減少的趨勢(shì)。用順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后，低表達(dá)UCHL1的細(xì)胞其凋亡水平也更低。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，低表達(dá)UCHL1的細(xì)胞具有更高的順鉑耐藥能力（IC50值）。為了考察UCHL1表達(dá)量與順鉑耐藥性之間的關(guān)系，我們?cè)?個(gè)卵巢癌細(xì)胞系中檢測(cè)了其UCHL1的mRNA及順鉑耐藥能力。結(jié)果表明，UCHL1表達(dá)量越高

4、，對(duì)順鉑越敏感;UCHL1表達(dá)量越低，對(duì)順鉑越耐受。UCHL1的表達(dá)量與IC50值之間具有負(fù)相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為-0.96(p＜0.001)。我們分析了一篇已發(fā)表文獻(xiàn)中卡鉑（也是鉑類化合物，生化特征與順鉑很相似）敏感的卵巢癌病人與卡鉑耐藥卵巢癌病人的基因芯片數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)卡鉑敏感病人其UCHL1表達(dá)量高，而耐藥病人其UCHL1表達(dá)量低。接下來(lái)，我們發(fā)現(xiàn)UCHL1的表達(dá)量與其啟動(dòng)子區(qū)超甲基化狀態(tài)相關(guān)。UCHL1表達(dá)量高的細(xì)胞系，其啟動(dòng)子區(qū)不存

5、在超甲基化;而表達(dá)量低的細(xì)胞系，其啟動(dòng)子區(qū)無(wú)一例外地存在超甲基化。去甲基化藥物處理UCHL1表達(dá)量低的細(xì)胞系能提高UCHL1的表達(dá)，更進(jìn)一步確定了其啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)。
　　 本文的第二部分，我們對(duì)低表達(dá)UCHL1引起的生物學(xué)現(xiàn)象進(jìn)行了機(jī)制上的研究。首先，我們對(duì)低表達(dá)UCHL1前后的卵巢癌細(xì)胞做了全基因組芯片。對(duì)芯片數(shù)據(jù)分析后我們發(fā)現(xiàn)，表達(dá)差異在2倍以上的基因富集在細(xì)胞凋亡相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程中，這個(gè)結(jié)果說(shuō)明UCHL1主要參與調(diào)控

6、細(xì)胞的凋亡過(guò)程。我們還分析得到了一系列UCHL1調(diào)控的細(xì)胞凋亡相關(guān)基因，其中BCL2表達(dá)上調(diào)引人注目。我們還發(fā)現(xiàn)BCL2家族的另一成員Bax表達(dá)下調(diào)，而作為關(guān)鍵的凋亡調(diào)節(jié)基因p53，其表達(dá)量并無(wú)顯著改變。重新低表達(dá)BCL2后細(xì)胞增殖放緩，順鉑誘導(dǎo)產(chǎn)生的凋亡增加，而且順鉑IC50值也減少。另外我們還發(fā)現(xiàn)低表達(dá)UCHL1的細(xì)胞磷酸化AKT表達(dá)上升，說(shuō)明AKT通路在一定程度活性增加。這些結(jié)果表明，低表達(dá)UCHL1很可能是通過(guò)上調(diào)BCL2及AK