TRPV6在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其對卵巢癌細(xì)胞系增殖活性的影響.pdf

1、目的：
　　探討瞬時性受體電位通道香草酸亞型6(transient receptor potential vanilloid6，TRPV6)在卵巢癌細(xì)胞系SKOV3及3AO中的的表達(dá)；探討SiRNA干擾卵巢癌SKOV3細(xì)胞后TRPV6mRNA表達(dá)的改變，探討其對卵巢癌細(xì)胞株SKOV3增殖以及凋亡的影響；免疫組化方法檢測TRPV6蛋白在上皮性卵巢腫瘤及卵巢組織中的表達(dá)，探討其在卵巢癌發(fā)生及發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　

2、①采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測瞬時性受體電位通道香草酸亞型6(transient receptor potential vanilloid6，TRPV6)在上皮性卵巢癌細(xì)胞系SKOV3及3AO中的表達(dá)情況；
　?、跇?gòu)建TRPV6小干擾RNA（siRNA）序列；體外培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞，在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染siRNA干擾TRPV6，半定量RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后不同時間SKOV3細(xì)胞中TRPV6mRNA的表達(dá)；MTT比色實(shí)驗(yàn)

3、和流式細(xì)胞技術(shù)測定siRNA沉默TRPV6基因表達(dá)后SKOV3細(xì)胞增殖及凋亡的變化，探討siRNA沉默TRPV6基因?qū)β殉舶┘?xì)胞增值及凋亡的影響；
　?、勖庖呓M化方法檢測TRPV6蛋白在上皮性卵巢癌、卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　?、賀T-PCR研究結(jié)果表明,上皮性卵巢癌細(xì)胞系SKOV3及3AO均表達(dá)TRPV6mRNA，其擴(kuò)增片斷長度為300bp，且發(fā)現(xiàn)SKOV3細(xì)胞TRPV6mRNA與β-a

4、ctin mRNA光密度比值為0.95±0.06；3AO細(xì)胞TRPV6mRNA與β-actinmRNA光密度比值為0.94±0.04；比較TRPV6mRNA在兩種腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)量無顯著性差異(P＞0.05)；
　?、趕iRNA序列有效地阻斷了SKOV3細(xì)胞中TRPV6基因的表達(dá)，且隨著時間的延長TRPV6表達(dá)逐漸下降；MTT結(jié)果顯示siRNATRPV6轉(zhuǎn)染組SKOV3細(xì)胞增殖活性與空白對照組和陰性對照組相比明顯受到抑制；流式細(xì)胞

5、儀檢測顯示轉(zhuǎn)染siRNATRPV648小時后細(xì)胞的凋亡率明顯增加；
　?、跿RPV6蛋白在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)升高，在良性卵巢腫瘤中有較少表達(dá)，在正常卵巢組織中未見明顯表達(dá)，在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與病理分級及臨床分期有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　①上皮性卵巢癌細(xì)胞系SKOV3及3AO中均表達(dá)TRPV6mRNA；
　　②沉默TRPV6基因在體外能使其表達(dá)水平下降，可顯著降低卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖活性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，