腦靶向復方納米膠束治療HER-2陽性乳腺癌腦轉移的實驗研究.pdf

1、第一部分：腦靶向紫杉醇-拉帕替尼復方載藥納米膠束的制備及表征
　　目的:近二十年來，乳腺癌在全球女性中的發(fā)病率居高不下，尤其是在很多發(fā)達國家和地區(qū)，長居發(fā)病率首位，在欠發(fā)達國家和地區(qū)，乳腺癌的發(fā)病率也有不斷增長的趨勢。隨著乳腺癌分子分型治療模式的廣泛應用，以及靶向治療藥物的不斷問世，乳腺癌的總體預后得到了明顯的改善。HER-2陽性型乳腺癌的總生存也隨著抗HER-2靶向藥物的加入而顯著延長。然而，腦轉移的發(fā)生率卻隨著伴隨著生存的延長

2、而增加。目前腦轉移主要的治療方法仍然是手術或腦立體定向放療為主，尚缺乏一種有效的針對乳腺癌腦轉移病灶的治療藥物。本部分研究旨在研發(fā)一種具有腦靶向功能的復方納米載藥系統(tǒng)，使載有紫杉醇和拉帕替尼的納米膠束能較高濃度地通過血腦屏障，治療乳腺癌腦轉移。
　　方法:以聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)為載體，采用薄膜水化法（溶劑揮發(fā)法）制備膠束，包裹水溶性差的拉帕替尼和紫杉醇，制成載藥納米膠束（以下簡稱膠束）。首先制備單藥膠束，檢測膠束各項

3、理化性質(zhì)，證實該種方法制備的膠束能夠滿足進一步實驗要求。在此基礎上制備復方膠束。分別測定復方膠束對紫杉醇和拉帕替尼的載藥率包封率和穩(wěn)定性。將具有親大腦內(nèi)皮細胞功能的靶向短肽分子Angiopep-2以氨基與聚合物外殼的羧基連接。在體外實驗中，驗證接有靶向分子的膠束能夠穿透血腦屏障。
　　結果:薄膜水化法制備的復方載藥膠束(MIC-LPTN+PTX)粒徑為16.23±0.75nm，接有靶向分子的膠束(ANG-MIC-LPTN+PTX)

4、粒徑為18.80±0.97 nm。紫杉醇的載藥率是2.9±0.8％，包封率95.97±3.17％，對拉帕替尼的載藥率是6.82±1.16％，包封率91.21±2.83％，并且能夠在4℃時具有良好的穩(wěn)定性。接有靶向分子的膠束在體外血腦屏障模型中，在相同條件相同時間下，與不接靶向分子的膠束相比，具有更明顯的腦靶向功能優(yōu)勢。
　　結論:載有紫杉醇和拉帕替尼的復方納米膠束具有良好的物理特性。膠束粒徑為20nm，能夠少量穿透體外血腦屏障模型

5、。連接Angiopep-2腦靶向分子后的復合膠束，具有良好的穿透血腦屏障的功能。
　　第二部分：Ang化復方膠束的腦靶向性研究及抗腫瘤效應的實驗研究
　　目的:目前針對乳腺癌腦轉移，臨床可用藥物屈指可數(shù)，且效果欠佳。論文的第一部分已經(jīng)證實，在體外實驗中，我們制備的復方納米載藥膠束具有良好的腦靶向功能。本部分的研究旨在通過體外細胞毒實驗及活體動物體內(nèi)，驗證復方靶向納米載藥膠束具有有效的抗HER-2陽性乳腺癌腦轉移作用，能夠延長

6、荷瘤鼠的生存期。
　　方法:體外細胞毒實驗，使用兩種復方膠束分別作用于HER-2陽性與陰性細胞株，分別比較兩種膠束對同一細胞株的抑制能力，并且比較雙極靶向復方膠束對兩種細胞的抑制能力。使用腦定位立體定位儀給裸鼠定向接種乳腺癌細胞Skbr-3（HER-2過表達），若干天后觀察裸鼠行為狀態(tài)，隨機選取兩只裸鼠，取腦組織，肉眼觀察證實腦部已有乳腺癌腫瘤組織。將裸鼠隨機分組，每八只一組，三組分別為生理鹽水組，未接靶向分子膠束組，接有靶向分子

7、膠束組。每三天給藥，共十次，給藥量為7.5 mg/kg/3 d，拉帕替尼∶紫杉醇=2∶1。記錄每組荷瘤鼠死亡日期，從第一次給藥開始共觀察60天。繪制生存曲線，得出中位生存期。
　　結果:兩種膠束比較，從對兩種細胞的抑制能力而言，雙極靶向復方納米膠束對細胞的抑制能力更強。而雙極靶向復方納米膠束對HER-2陽性細胞株的抑制能力更強。在腦轉移瘤模型鼠體內(nèi)，接有靶向分子的膠束能夠在更短的時間內(nèi)穿透血腦屏障，到達病變組織。在三組荷瘤鼠中，接