膜結(jié)合型人類白細(xì)胞抗原G在胚胎植入及母胎免疫耐受中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　成功的胚胎植入是成功妊娠的開(kāi)始，在胚胎植入過(guò)程中，重要標(biāo)志是滋養(yǎng)層細(xì)胞向子宮內(nèi)膜侵入，在這個(gè)過(guò)程中涉及到很多分子水平的變化。人類白細(xì)胞抗原G（HLA-G）在滋養(yǎng)層細(xì)胞尤其是絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞高表達(dá)，提示它在胚胎植入過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。
　　目的：
　　1）建立穩(wěn)定表達(dá)HLA-G1的滋養(yǎng)細(xì)胞株，為研究 HLA-G在滋養(yǎng)細(xì)胞的功能提供有效的工具；
　　2）探討人類白細(xì)胞抗原G（HLA-G）在介導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞免

2、疫耐受以及對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、黏附及侵襲能力的影響，了解HLA-G基因在胚胎植入及子宮螺旋動(dòng)脈重塑過(guò)程中的作用。
　　方法：
　　1）包裝HLA-G1慢病毒并以之轉(zhuǎn)染 HLA-G表達(dá)陰性的人滋養(yǎng)細(xì)胞系；
　　2）檢測(cè)HLA-G1對(duì) NK-92MI細(xì)胞對(duì) JAR細(xì)胞細(xì)胞毒作用的影響；
　　3）分別用CCK-8比色法、溴脫氧尿苷（BrdU）ELISA法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組（穩(wěn)定表達(dá)HLA-G1）和對(duì)照組細(xì)胞增殖能力的變化，流式細(xì)胞

3、技術(shù)分析其相對(duì)應(yīng)細(xì)胞周期和凋亡的變化。
　　4）細(xì)胞外基質(zhì)陣列比色法、纖維連接蛋白鋪底加CCK-8比色法以及子宮內(nèi)膜細(xì)胞鋪底加CCK-8比色法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞黏附能力的變化。
　　5）穿膜小室侵襲實(shí)驗(yàn)（Transwell）分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞侵襲能力的變化，以及缺氧和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Hepatocyte growth factor, HGF）對(duì)各組侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1）通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的

4、HLA-G1可以在兩種不同的滋養(yǎng)細(xì)胞株穩(wěn)定表達(dá)；
　　2）從效靶比為1.25：1開(kāi)始，NK-92MI細(xì)胞對(duì)對(duì)照組的細(xì)胞毒作用開(kāi)始強(qiáng)于實(shí)驗(yàn)組，隨著效靶比的增加，抑制作用越發(fā)明顯（P<0.05）；
　　3）實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，CCK-8的吸光度值，BrdU ELISA檢測(cè)的吸光度值均無(wú)明顯差異（P＞0.05），流式細(xì)胞分析 S期細(xì)胞比例實(shí)驗(yàn)組為(47.07±3.15)％，對(duì)照組為(46.29±0.77)%。兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

5、P＞0.05）；兩組均無(wú)明顯細(xì)胞凋亡；
　　4）細(xì)胞外基質(zhì)陣列比色法、纖維連接蛋白鋪底加 CCK8比色法、子宮內(nèi)膜細(xì)胞鋪底加CCK-8比色法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組吸光度值，兩組相比較，吸光度值均無(wú)明顯差異（P＞0.05）；
　　5）Transwell小室中的穿膜細(xì)胞數(shù)，實(shí)驗(yàn)組（66±19）與空白對(duì)照組（67±17）比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），加入肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子后，實(shí)驗(yàn)組（40±20）浸潤(rùn)能力較對(duì)照組（66±19）有明顯減弱

6、（P＜0.05）；在缺氧條件下，JAR的浸潤(rùn)能力下降，但HLA-G1對(duì) HGF介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲的抑制作用也變得不再顯著（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1）HLA-G是一個(gè)重要的免疫抑制分子，在介導(dǎo)母胎免疫耐受中發(fā)揮重要作用；
　　2）HLA-G不能作為一個(gè)獨(dú)立因素影響滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、黏附、浸潤(rùn)功能；
　　3）HLA-G可以抑制HGF介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲作用，這種抑制效應(yīng)在缺氧條件下會(huì)減弱或消失。提示HLA-G可能與其