過繼轉(zhuǎn)輸父系抗原anergiccd439;t細(xì)胞誘導(dǎo)母—胎免疫耐受的分子機(jī)制

1、橇旦大擎} 校代日：0 2 4 6博士學(xué)位論文過繼轉(zhuǎn)輸父系抗原m 咄∞4 _ T 細(xì)胞禱導(dǎo)母一胎免疫耐受的分子機(jī)制院專姓系業(yè)名指導(dǎo)教師完成日期婦產(chǎn)利醫(yī)院婦產(chǎn)科學(xué)朱曉勇李：托金教援中文摘要定此a n e r g i c C D 4 + T 細(xì)胞的免疫生物學(xué)功能。方法 以非孕期C B A 雌鼠來源C D 4 + T 細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，以滅活處理的D B A ／2 雄鼠脾細(xì)胞為刺激抗原，加入抗C D 8 0 和抗C D 8 6 單克隆抗體共培養(yǎng)

2、，誘導(dǎo)制備父系抗原( c ? D S m 2 A g ) a n e r g i c C D 4 + T 細(xì)胞。R T - P C R 測(cè)定a n e r g i c C D 4 +T 細(xì)胞中G R A I L ( g e n e r e l a t e d t oa n e r g y i nl y m p h o c y t e ) 的轉(zhuǎn)錄水平；分析a n e r g i cC D 4 + T 細(xì)胞對(duì)不同刺激原刺激的增殖反應(yīng)：E L

3、 I s A 測(cè)定經(jīng)父系抗原再刺激后，a n e r g i cC D 4 + T 細(xì)胞培養(yǎng)上清中T h l ／T h 2 型細(xì)胞因子水平；M L R 及T r a n s w e l l 鑒定a n e r g i cC D 4 + T 細(xì)胞對(duì)n a i v e C D 4 + T 細(xì)胞的抑制性免疫調(diào)控作用及其劑量依賴性、抗原特異性，以及抑制性免疫調(diào)控作用的機(jī)制。結(jié)果D B A ／2 一a n e r g i cC D 4 + T 細(xì)

4、胞中，a n e r g y 特征性標(biāo)志物G R A I L 的轉(zhuǎn)錄顯著增強(qiáng)；D B A ／2 ．a(chǎn) n e r g i cC D 4 + T 細(xì)胞仍保持對(duì)多克隆激活劑C o n A 、P M A +i o n o m y c i n 刺激的增殖能力，但對(duì)a n t i ．C D 3m A b 刺激以及D B A ／2 A g 再刺激均無顯著增殖效應(yīng)；外源性I L ．2 能夠逆轉(zhuǎn)C D 4 + T 細(xì)胞的a n e r g y 狀態(tài)：a

5、 n e r g i c C D 4 + T細(xì)胞能夠通過細(xì)胞與細(xì)胞間的直接接觸，發(fā)揮對(duì)n a i v e C D 4 + T 細(xì)胞的免疫抑制效應(yīng)，而且此免疫抑制效應(yīng)具有抗原特異性和劑量依賴性。結(jié)論D B A ／2 ．a(chǎn) n e r g i c C D 4 + T 細(xì)胞對(duì)n a i v eC D 4 + T 細(xì)胞針對(duì)D B A ／2 A g 的免疫應(yīng)答具有抗原特異性免疫抑制作用，其免疫抑制并非細(xì)胞因子介導(dǎo)，而是由細(xì)胞與細(xì)胞間的直接接觸所介

6、導(dǎo)。第二部分T r e g 在誘導(dǎo)父系抗原a n e r g i c C D 4 + T 細(xì)胞中的作用目的揭示C D 4 + C D 2 5 + 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞( T r e g ) 在誘導(dǎo)D B A ／2 一a n e r g i c C D 4 +T 細(xì)胞中的作用。方法以N a i v e C D 4 + T 細(xì)胞為對(duì)照，F(xiàn) C M 分析D B A ／2 ．a(chǎn) n e r g i c C D 4 + T 細(xì)胞中C D 4 + C D

7、 2 5 + T 細(xì)胞亞群變化及其細(xì)胞內(nèi)C T L A - 4 表達(dá)；R T - P C R 檢測(cè)F o x p 3m R N A在a l l e r g i cC D 4 + T 細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平；免疫磁珠分選非孕期C B A 雌鼠脾臟細(xì)胞中C D 4 + C D 2 5 + T 細(xì)胞、C D 4 + C D 2 5 ‘T 細(xì)胞；F C M 鑒定C D 4 + C D 2 5 + 、C D 4 + C D 2 5 。T 細(xì)胞純度；將C

8、 D 4 + C D 2 5 + 、C D 4 + C D 2 5 ‘T 細(xì)胞按不同比例混合，以滅活處理的D B ～2 雄鼠脾細(xì)胞為刺激抗原，在加或不加a n t i —C D 8 0 ／C D 8 6 m A b 的條件下進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。E L I s A 測(cè)定混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中I L ．2 表達(dá)水平。結(jié)果D B A ／2 一a n e r g i cC D 4 + T 細(xì)胞中存在C D 4 + C D 2 5 + T 細(xì)胞