過繼轉(zhuǎn)輸父系抗原anergiccd439;t細胞誘導(dǎo)母—胎免疫耐受的分子機制_第1頁
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1、橇旦大擎} 校代日:0 2 4 6博士學(xué)位論文過繼轉(zhuǎn)輸父系抗原m 咄∞4 _ T 細胞禱導(dǎo)母一胎免疫耐受的分子機制院專姓系業(yè)名指導(dǎo)教師完成日期婦產(chǎn)利醫(yī)院婦產(chǎn)科學(xué)朱曉勇李:托金教援中文摘要定此a n e r g i c C D 4 + T 細胞的免疫生物學(xué)功能。方法 以非孕期C B A 雌鼠來源C D 4 + T 細胞為反應(yīng)細胞,以滅活處理的D B A /2 雄鼠脾細胞為刺激抗原,加入抗C D 8 0 和抗C D 8 6 單克隆抗體共培養(yǎng)

2、,誘導(dǎo)制備父系抗原( c ? D S m 2 A g ) a n e r g i c C D 4 + T 細胞。R T - P C R 測定a n e r g i c C D 4 +T 細胞中G R A I L ( g e n e r e l a t e d t oa n e r g y i nl y m p h o c y t e ) 的轉(zhuǎn)錄水平;分析a n e r g i cC D 4 + T 細胞對不同刺激原刺激的增殖反應(yīng):E L

3、 I s A 測定經(jīng)父系抗原再刺激后,a n e r g i cC D 4 + T 細胞培養(yǎng)上清中T h l /T h 2 型細胞因子水平;M L R 及T r a n s w e l l 鑒定a n e r g i cC D 4 + T 細胞對n a i v e C D 4 + T 細胞的抑制性免疫調(diào)控作用及其劑量依賴性、抗原特異性,以及抑制性免疫調(diào)控作用的機制。結(jié)果D B A /2 一a n e r g i cC D 4 + T 細

4、胞中,a n e r g y 特征性標(biāo)志物G R A I L 的轉(zhuǎn)錄顯著增強;D B A /2 .a(chǎn) n e r g i cC D 4 + T 細胞仍保持對多克隆激活劑C o n A 、P M A +i o n o m y c i n 刺激的增殖能力,但對a n t i .C D 3m A b 刺激以及D B A /2 A g 再刺激均無顯著增殖效應(yīng);外源性I L .2 能夠逆轉(zhuǎn)C D 4 + T 細胞的a n e r g y 狀態(tài):a

5、 n e r g i c C D 4 + T細胞能夠通過細胞與細胞間的直接接觸,發(fā)揮對n a i v e C D 4 + T 細胞的免疫抑制效應(yīng),而且此免疫抑制效應(yīng)具有抗原特異性和劑量依賴性。結(jié)論D B A /2 .a(chǎn) n e r g i c C D 4 + T 細胞對n a i v eC D 4 + T 細胞針對D B A /2 A g 的免疫應(yīng)答具有抗原特異性免疫抑制作用,其免疫抑制并非細胞因子介導(dǎo),而是由細胞與細胞間的直接接觸所介

6、導(dǎo)。第二部分T r e g 在誘導(dǎo)父系抗原a n e r g i c C D 4 + T 細胞中的作用目的揭示C D 4 + C D 2 5 + 調(diào)節(jié)性T 細胞( T r e g ) 在誘導(dǎo)D B A /2 一a n e r g i c C D 4 +T 細胞中的作用。方法以N a i v e C D 4 + T 細胞為對照,F(xiàn) C M 分析D B A /2 .a(chǎn) n e r g i c C D 4 + T 細胞中C D 4 + C D

7、 2 5 + T 細胞亞群變化及其細胞內(nèi)C T L A - 4 表達;R T - P C R 檢測F o x p 3m R N A在a l l e r g i cC D 4 + T 細胞中的轉(zhuǎn)錄水平;免疫磁珠分選非孕期C B A 雌鼠脾臟細胞中C D 4 + C D 2 5 + T 細胞、C D 4 + C D 2 5 ‘T 細胞;F C M 鑒定C D 4 + C D 2 5 + 、C D 4 + C D 2 5 。T 細胞純度;將C

8、 D 4 + C D 2 5 + 、C D 4 + C D 2 5 ‘T 細胞按不同比例混合,以滅活處理的D B ~2 雄鼠脾細胞為刺激抗原,在加或不加a n t i —C D 8 0 /C D 8 6 m A b 的條件下進行混合淋巴細胞培養(yǎng)。E L I s A 測定混合淋巴細胞培養(yǎng)上清中I L .2 表達水平。結(jié)果D B A /2 一a n e r g i cC D 4 + T 細胞中存在C D 4 + C D 2 5 + T 細胞

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