乙肝病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)區(qū)變異在慢性乙型肝炎自然史中的研究.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）基因的變異在慢性乙型肝炎病毒感染者中較為常見。目前雖然已有很多針對(duì)乙肝病毒變異的研究，但HBV逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)（reverse transcriptase，RT）自然變異的情況仍不清楚。本研究通過對(duì)慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）不同時(shí)期RT區(qū)自然變異的頻數(shù)、分布及來源的分析，描述HBVRT區(qū)基因自然變異的特點(diǎn)。
　　方法：共納入28例未經(jīng)核

2、苷（酸）類似物（nucleot(s)ide analogues, NAs）治療的 C HB患者血清標(biāo)本，包括免疫耐受期10例（immune-to lerant phase, IT），免疫活動(dòng)期9例（immune-active phase, IA）以及非活動(dòng)攜帶期9例（inactive carriers phase, IC）。通過巢式聚合酶鏈反應(yīng)（nest polymerase chain reaction, Nest-PCR）-克隆法擴(kuò)

3、增HBV RT區(qū)基因并采用Sanger法測(cè)序。運(yùn)用Contig Express，BLAST， MAFFT，MEGA5.0等軟件及GenBank, Genotyping Tools，HBVSeq， HBVdb等數(shù)據(jù)庫分析序列。
　　結(jié)果：從28例C HB患者（男性：53.57％；年齡中位數(shù)：28歲；基因B型：75%；基因C型，25%）成功獲得575條HBV RT全長(zhǎng)核酸序列（IT：224，IA：196，IC：155）。含RT突變的克

4、隆百分比中位數(shù)：IT組為16.07%(范圍:4.17%-52.00%)， IA組為44.90%(范圍:16.67%-69.57%)，IC組為43.20%(范圍:15.00%-100%)。準(zhǔn)種分析顯示IA組和IC組的RT區(qū)變異程度要顯著高于IT組，這種趨勢(shì)通過RT蛋白保守性分析也得到進(jìn)一步證實(shí)。在三組中共發(fā)現(xiàn)63個(gè)突變位點(diǎn)(IT：19，IA：37，IC：36)。這些變異位點(diǎn)在不同階段不同結(jié)構(gòu)區(qū)（domain區(qū)、inter-domain區(qū)）

5、及免疫表位（HLAⅠ表位、HLAⅡ表位以及“a”抗原決定簇）的分布及變異頻數(shù)存在著顯著差異。7.14%（2/28）的人群中檢測(cè)到了NAs預(yù)存耐藥（rtI169T, A181T,和S202G）。在同一克隆株中，HBsAg區(qū)發(fā)生的變異點(diǎn)數(shù)目總是較RT區(qū)多，且多數(shù)RT區(qū)變異位點(diǎn)與HBsAg區(qū)變異位點(diǎn)相一致。
　　結(jié)論：我們的結(jié)果表明：1. C HB自然史各個(gè)時(shí)期的RT區(qū)自然變異程度及其影響顯著不同；2.HBV RT區(qū)表現(xiàn)出很強(qiáng)的保守傾向