線粒體基因突變與非綜合性耳聾的相關性分析.pdf

1、聽力損失是一種常見疾病，影響了全世界近10％的人口。大多數(shù)聽力損失是非綜合性耳聾，由多種環(huán)境因素和遺傳因素造成的。其中氨基糖苷類藥物濫用是導致兒童耳聾的重要誘因，它能引起一些病人雙側(cè)的永久性耳聾，而在中國，氨基糖苷類藥物在臨床上廣泛使用。研究表明約30%雙側(cè)耳聾的發(fā)生與氨基糖苷類藥物使用相關，聽力損失的早期診斷，對于減輕耳聾對兒童語言發(fā)育和社會發(fā)展影響有重大意義。雖然近年來逐漸普及新生兒的聽力篩查，但傳統(tǒng)的聽力學檢查存在明顯缺陷，尤其是

2、兒童遲發(fā)性聽力損失診斷存在一定的誤診率。至少有50%的重度先天性耳聾是遺傳因素導致的。通過篩查聽力損傷相關的基因，可預測兒童遲發(fā)型耳聾的發(fā)病風險，并且這種預測不依賴于傳統(tǒng)的新生兒聽力學的檢測結果。同時，普及新生兒耳聾遺傳篩查，將對非綜合性聽力損失（NSHL）的研究進一步發(fā)展起引導作用。其中線粒體上的某些基因突變可能會改變?nèi)梭w對耳毒性藥物----氨基糖苷類抗生素的敏感性，因此檢測線粒體基因突變在耳聾遺傳篩查中有重要意義。但在中國人中哪些線

3、粒體基因突變位點可用于新生兒篩查？這些基因突變是否與聽力學檢測方法存在顯著的相關性暫無定論。此外，遺傳篩查補充新生兒標準聽力篩查的功效并未嚴格評估，線粒體基因突變和耳聾的相關性分子基礎和生理機制尚不清楚。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過新生兒線粒體基因變異的遺傳篩查，可以預測孩子的耳聾患病風險,并指導氨基糖苷類抗生素的使用禁忌。為了確定哪些線粒體遺傳位點適用于新生兒耳聾遺傳篩查，我們與臨床醫(yī)生合作開展線粒體基因突變和非綜合性耳聾的

4、相關性的研究，分析內(nèi)容包括種族效應，聽力學檢測方法，氨基糖苷類藥物使用等。通過對耳聾遺傳相關的541篇文獻進行調(diào)研，共收集了43篇文獻中線粒體基因的122個突變位點信息。研究發(fā)現(xiàn)8個突變位點與耳聾顯著相關：MT-RNA1基因上的961 ins/del，G988A，C1009T，A1382C，C1494T，A1557C，A1555G和MT-TT基因上的G15927A；此外，有6個基因位點與氨基糖苷類藥物性耳聾相關。在RNA折疊模型中分析發(fā)

5、現(xiàn)，其中5個位點在空間上共定位于氨基糖苷類敏感區(qū)域。在遺傳變異評估中發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)聽力檢測方法沒有檢測到耳聾發(fā)生，說明常規(guī)聽力篩查方法不能取代遺傳篩查中線粒體基因突變位點選擇。⑵在2014年武漢市76136名新生兒耳聾篩查項目中，我們把這些突變位點納入篩查內(nèi)容。篩查過程中使用了針對這些突變位點專門設計和開發(fā)的擴增阻礙突變系統(tǒng)PCR和 Sanger測序鑒定方法。作為武漢市進行的第一個大規(guī)模耳聾基因篩查項目，旨在評估基因篩查位點及篩查參數(shù)選取。通

6、過篩查，我們發(fā)現(xiàn)在本地區(qū) A1555G和C1494T遺傳突變頻率分別為1.58‰和0.13‰。后續(xù)研究將進一步分析這些突變位點與耳聾和氨基糖苷類藥物的相關性。⑶獲得性聽力損失包括藥物、噪音性、老年性聽力損失，以及其他一些疾病，線粒體的能量代謝調(diào)控是獲得性聽力損失病理過程的一個重要因素。而參與能量代謝的基因突變導致耳聾的機制尚不清楚,而且還有一些其他并發(fā)癥。為了研究 mtDNA基因突變誘發(fā)耳聾的潛在機制并確定哪些基因與線粒體基因相互作用誘

7、發(fā)耳聾，我們設計了兩個研究方案探索mtDNA突變引起耳聾的分子機理，并分析參與耳聾發(fā)生過程的基因是否受mtDNA基因突變影響。其中一項研究基于攜帶mtDNA突變的耳聾小鼠的耳蝸基因表達數(shù)據(jù),另外一項研究比對分析了攜帶 mtDNA突變耳聾患者和聽力正常對照的淋巴母細胞的基因表達譜。我們在小鼠耳蝸組織中發(fā)現(xiàn)84個基因通路和1418個顯著差異表達的基因，在攜帶線粒體A1555G突變個體中發(fā)現(xiàn)了18個基因通路和超過2000個差異表達基因，在兩項