非綜合征型耳聾患者五個(gè)耳聾相關(guān)線(xiàn)粒體候選基因的檢測(cè)及臨床表型分析.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)西北地區(qū)97例非綜合征型耳聾患者進(jìn)行線(xiàn)粒體DNA全序列擴(kuò)增測(cè)序，進(jìn)而分析可能致聾的mtDNA突變位點(diǎn)。
　　方法：采集中國(guó)西北五省、有家族史、無(wú)親緣關(guān)系的97例中度至極重度非綜合征型耳聾先證者的血樣，并收集相關(guān)的臨床及家系資料，另外收集376例聽(tīng)力正常人群作為對(duì)照組。用傳統(tǒng)酚氯仿法提取相關(guān)基因組DNA，并用24對(duì)有部分重疊的正反向引物進(jìn)行線(xiàn)粒體DNA全序列PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增后測(cè)序，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，查找所有的線(xiàn)粒體DNA突

2、變位點(diǎn)，確定線(xiàn)粒體單體型，分析突變位點(diǎn)保守性、突變位點(diǎn)的突變頻率、突變可能對(duì)基因二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響，從而查找致聾的線(xiàn)粒體候選基因。
　　結(jié)果：1、在病例組，男女患者比例為0.9:1（46:51），平均檢測(cè)年齡為22±0.10歲，平均發(fā)病年齡3±0.83歲，聽(tīng)力損失從中度到極重度不等，其中10例先證者具有氨基糖苷類(lèi)用藥史。對(duì)照組男女比例為0.9:1（181:195），平均采集年齡25±4.12歲。
　　2、病例組篩查到706個(gè)線(xiàn)粒

3、體突變位點(diǎn)，其中D-loop區(qū)180個(gè)，12S rRNA基因27個(gè)（1個(gè)新位點(diǎn)和26個(gè)已報(bào)道位點(diǎn)），16S rRNA基因29個(gè)（7個(gè)新位點(diǎn)和22個(gè)已報(bào)道位點(diǎn)），tRNA基因29個(gè)（3個(gè)新位點(diǎn)和26個(gè)已報(bào)道位點(diǎn)），蛋白編碼區(qū)434個(gè)，包含122個(gè)錯(cuò)義突變（4個(gè)新位點(diǎn)和108個(gè)已報(bào)道位點(diǎn)）和312個(gè)同義突變（20個(gè)新位點(diǎn)和292個(gè)已報(bào)道位點(diǎn)），非編碼區(qū)7個(gè)。
　　3、在病例組中，單體型D，G，M7，M8，M10，M11，M12，A，B

4、4，F(xiàn)，H，N和R的頻率分別為24.74％，7.22%，5.15%，10.31%，1.03%，1.03%，1.03%，8.25%，5.15%，13.40%，7.22%，7.22%和8.25%，而在對(duì)照組中，它們的頻率分別為21.54%，4.26%，6.91%，10.64%，1.33%，0.53%，0.00%，6.65%，18.62%，15.96%，0.80%，8.78%和2.39%。其中單體型B、H、T在病例組和對(duì)照組之間的頻數(shù)差異具有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)了五個(gè)與耳聾相關(guān)的線(xiàn)粒體候選基因。
　　1、12S rRNA基因上新突變位點(diǎn)1473C>T，可能改變了12S rRNA的三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)，影響線(xiàn)粒體蛋白質(zhì)的合成，從而影響線(xiàn)粒體的功能。
　　2、tRNA基因上新突變位點(diǎn)614A>C位于tRNAPhe反密碼子環(huán)上（A37），突變可能影響密碼子識(shí)別的精確性，從而影響tRNA結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性；新突變位點(diǎn)8339A>G位于tRNALys的T

6、臂上（A50），突變破壞了原有的A-U配對(duì)，tRNA結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定性受到影響。
　　3、5656A>G位于輕鏈tRNAAla和輕鏈tRNAAsn之間，突變可影響tRNAAla和tRNAAsn前體的處理，易導(dǎo)致臨床表型異常。
　　4、線(xiàn)粒體ND13866T>C使NADH脫氫酶亞單位1上的極性疏水性異亮氨酸向蘇氨酸過(guò)渡，影響NADH脫氫酶活性和破壞線(xiàn)粒體的正常功能，進(jìn)而造成內(nèi)耳的毛細(xì)胞損傷。
　　5、單體型H、T在病組和對(duì)