蟲生真菌-萊氏野村菌Nr1001菌株的生物學(xué)研究與應(yīng)用.pdf

1、本文以從河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)試驗(yàn)與示范基地的花生田罹病甜菜夜蛾幼蟲蟲尸上分離獲得一株蟲生真菌菌株(編號(hào)為1001)為研究對(duì)象，從形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)方面對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，并對(duì)該菌株的生物學(xué)特性、大規(guī)模培養(yǎng)方法、室內(nèi)及田間防治效果等方面進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下：
　　 通過室外采集樣品，用組織分離法在PDA培養(yǎng)基上對(duì)所獲得的菌株進(jìn)行分離篩選，獲得一株對(duì)鱗翅目夜蛾科幼蟲具有較高毒力的蟲生真菌菌株，編號(hào)為1001。
　　 將

2、該菌株在PDA和SMAY培養(yǎng)基上培養(yǎng)，并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，結(jié)果表明，在PDA培養(yǎng)基上，菌落呈致密的短絨毛狀，初時(shí)白色，且生長(zhǎng)緩慢，一個(gè)月內(nèi)直徑才達(dá)0.6～1.8cm。在SMAY培養(yǎng)基上10天后的菌落直徑2.6cm，約5-7天后產(chǎn)孢，產(chǎn)孢后菌落為黃綠色或綠色，大約10-15天后，孢子會(huì)被新萌發(fā)的菌絲所覆蓋，無(wú)霉味和滲出物，背面無(wú)色或微黃。
　　 通過對(duì)該菌株進(jìn)行顯微觀察，結(jié)果表明，其分生孢子呈橢圓形或圓筒形，一端稍尖，一端略鈍，

3、表面光滑，有些孢子之間有連接，淡綠色。分生孢子大小為(4.5～5.2)×(2.8～3.5)μm。營(yíng)養(yǎng)菌絲光滑，分隔，透明或稍帶顏色，菌絲直徑2μm-3μm，無(wú)孢梗束。該菌株初步鑒定為萊氏野村菌。
　　 用分子生物學(xué)方法對(duì)該菌株的rDNA-ITS序列進(jìn)行測(cè)序并在NCBI網(wǎng)站GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果表明，該菌ITS序列長(zhǎng)度為619bp，與NomuraearileyiMAFF830007同源性為99％；與另外兩個(gè)Nom

4、uraearileyi菌株的序列也只有3個(gè)堿基的差別，由此，進(jìn)一步判定該菌株為萊氏野村菌(Nomuraearileyi)。
　　 將該菌株在含有不同C、N源、C/N及維生素和微量元素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，并通過DPS軟件進(jìn)行分析，結(jié)果表明，適宜菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的的碳源分別為葡萄糖和棉子糖，氮源為酵母粉；當(dāng)C/N比分別為15:1和30:1時(shí)，最適宜其菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢，添加微量元素錳、鐵和維生素VB3、VB12等對(duì)萊氏野村菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)孢有

5、促進(jìn)作用。
　　 將該菌株在不同的溫度、pH、濕度、光照、接種量及搖床轉(zhuǎn)速下進(jìn)行固體和液體培養(yǎng)，并用DPS軟件進(jìn)行分析，結(jié)果表明，在固體培養(yǎng)條件下，最適宜生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的溫度、pH和光照和濕度分別為30℃和25℃、pH=7、8L/16D和95％。在液體培養(yǎng)條件下，當(dāng)pH為6時(shí)最適宜其生長(zhǎng)，當(dāng)接種量和搖床轉(zhuǎn)速分別為1ml和180rpm時(shí)，菌絲干重達(dá)到最大值。
　　 通過四因素五水平的正交試驗(yàn)，用SPSS軟件進(jìn)行分析，篩選出了最

6、利于其產(chǎn)孢的固體培養(yǎng)基配方為麥芽糖20g/L、酵母5g/L、Mn1.5mg/L、VB120.1mg/L。
　　 用液固雙相法大量培養(yǎng)萊氏野村菌分生孢子，結(jié)果表明：以60g大豆為基質(zhì)加入6％麥芽糖的組合為大量培養(yǎng)萊氏野村菌分生孢子最優(yōu)配方。
　　 以濃度分別為1.14×109孢子·mL-1、1.14×108孢子·mL-1、1.14×107孢子·mL-1、1.14×106孢子·mL-1、1.14×105孢子·mL-1的Nr1

7、001孢懸液對(duì)棉鈴蟲三齡幼蟲進(jìn)行室內(nèi)毒力試驗(yàn)，經(jīng)過SPSS軟件分析，死亡率分別為70.53％、46.4％、34.4％、22.19％、19.12％，接種后第13天的致死中濃度為L(zhǎng)C50=1.163×108個(gè)孢子·mL-1，毒力回歸方程式為：Y=0.383X-3.088。
　　 用9種不同藥劑進(jìn)行田間試驗(yàn)并用DPS軟件進(jìn)行分析，結(jié)果表明，萊氏野村菌Nr1001菌株對(duì)大豆田夜蛾科幼蟲具有較好的防治效果，施藥后3天、7天、14天蟲口減退