云南地區(qū)恒河猴MHC部分基因頻率及多態(tài)性的分析.pdf

1、不同種群的恒河猴(Macacamulatta)MHC(majorhistocompatibilitycomplex)基因的差異性，很大程度上影響了用其作為動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的穩(wěn)定性、可靠性和可重復(fù)性。因此清晰的了解云南地區(qū)恒河猴種群免疫遺傳學(xué)背景對(duì)于運(yùn)用該種群開(kāi)展各項(xiàng)研究是非常重要的。 恒河猴MHCⅠ類(lèi)基因Mamu(MacacamulattaMHCgene)-A目前已有大量報(bào)道證明它與很多疾病的易感性和發(fā)病進(jìn)程相關(guān)。Mamu

2、-A*01位點(diǎn)陽(yáng)性就被公認(rèn)與猴免疫缺陷病毒(SIV)的感染與延緩病程相聯(lián)系。另外A﹡02、A﹡04也有報(bào)道證實(shí)這兩個(gè)位點(diǎn)同樣與SIV感染后的病程發(fā)展有關(guān)；Mamu-Ⅱ類(lèi)基因在很多疾病尤其是病毒感染中也起了非常重要的作用，部分位點(diǎn)被證明也與SIV感染后的病程發(fā)展有關(guān)。 針對(duì)目前研究熱點(diǎn)的恒河猴MHC基因MamuⅠ類(lèi)基因及Ⅱ類(lèi)基因部分位點(diǎn)，采用序列特異性引物一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分型方法(PCR-SSP)，對(duì)云南地區(qū)的140只恒河猴(其中

3、92只來(lái)源于云南景東野外自然繁殖群、48只來(lái)源于本靈長(zhǎng)類(lèi)中心自繁群)的MamuⅠ類(lèi)基因Mamu-A﹡01至A﹡06這6個(gè)等位基因，和MamuⅡ類(lèi)基因Mamu-DRB區(qū)的Mamu-DRBI*0303、0305/06、0309、0403、1005/07：DRB3*0403；DRB5*0301/02；DRB6*0101、0103、0104/05這10個(gè)等位基因進(jìn)行檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示MamuⅠ類(lèi)基因Mamu-A﹡01至A﹡06位點(diǎn)結(jié)果為陰性；所

4、檢測(cè)的MamuⅡ類(lèi)基因Mamu-DRB區(qū)10個(gè)等位基因陽(yáng)性率分別為，野外群DRB1*0305/06位點(diǎn)34.8％；DRB1*0309位點(diǎn)41.3％；DRB1*0403位點(diǎn)27.2％：DRB3*0403位點(diǎn)40.2％；DRB6*0101位點(diǎn)40.2％；DRB6*0103位點(diǎn)95.7％。自繁群DRB1*0305/06位點(diǎn)45.8％；DRB1*0309位點(diǎn)58.3％；DRB1*0403位點(diǎn)22.9％；DRB3*0403位點(diǎn)66.7％；DRB6

5、*0101位點(diǎn)54.2％；DRB6*0103位點(diǎn)62.5％，其余位點(diǎn)結(jié)果為陰性。與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)及印度猴群比較發(fā)現(xiàn)，云南地區(qū)的猴群攜帶的MHC基因有所不同。另外比較云南地區(qū)的野外群與自繁群的MHC基因情況發(fā)現(xiàn)，這兩個(gè)群體間并未出現(xiàn)基因多態(tài)性的顯著差別。 為進(jìn)一步驗(yàn)證檢測(cè)出的各位點(diǎn)各等位基因擴(kuò)增產(chǎn)物的正確性，選?、蝾?lèi)基因Mamu-DRB區(qū)的Mamu-DRB1*0305/06、0309位點(diǎn)進(jìn)行了部分測(cè)序并結(jié)合單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSC

6、P)的方法進(jìn)行深入分析。發(fā)現(xiàn)抽取的三個(gè)Mamu-DRB1*0305/06位點(diǎn)陽(yáng)性樣本測(cè)序結(jié)果中2個(gè)與GenBank參考序列完全相同，另一個(gè)檢測(cè)出5個(gè)堿基的突變；隨機(jī)抽取的2個(gè)Mamu-DRB1*0309位點(diǎn)陽(yáng)性樣本測(cè)序結(jié)果都與GenBank參考序列完全相同。SSCP檢測(cè)結(jié)果顯示有大于80％的陽(yáng)性樣本與測(cè)序樣本相同，即含同一等位基因，引物針對(duì)本次實(shí)驗(yàn)研究種群特異性較好。初步證明用SSCP方法進(jìn)行準(zhǔn)確性控制是可行的。 直接測(cè)序和SS