艾灸調控實驗性RA模型T細胞功能的PD-1-PD-L1機制研究.pdf

1、目的：
　　本研究在中醫(yī)針灸理論的指導下，以“PD-1/PD-L1信號通路—T細胞功能—抗炎效應”為研究主線，選擇PD-1、PD-L1為研究切入點，緊扣RA免疫反應之“因”和滑膜炎癥病理反應之“果”這兩個關鍵環(huán)節(jié)，運用免疫組化、Elisa等方法技術，探索艾灸對實驗性RA模型T細胞功能的影響及其PD-1/PD-L1負性調控機制，深化灸法治療RA的作用機理研究。
　　方法：
　　以日本大耳白兔30只作為實驗對象，隨機分為正

2、常對照組（簡稱“對照組”）、RA模型組（簡稱“模型組”）、艾灸治療組（簡稱“治療組”），10只動物/組。將弗氏完全佐劑（CFA）按0.5mL/kg體重的劑量注入模型組和治療組各家兔的雙后膝關節(jié)腔內建立RA模型。從實驗第8天開始對治療組各家兔采用艾炷灸“腎俞”、“足三里”穴進行治療，每穴連續(xù)施灸5壯，1次/d，6d為1療程，總計3療程，療程之間休息1d。分別于實驗第1、7、14、21、28天觀察RA家兔的整體狀況、膝關節(jié)周長，光鏡下觀察滑

3、膜組織炎癥病理形態(tài)；于實驗第28天，進行滑膜組織、滑膜液、脾臟、血清樣本采集，使用Elisa雙抗夾心法檢測滑膜液中T細胞促炎因子IL-2、IFN-γ、IL-17含量以及血清中p56lck和p59fyn的含量，采用S-P免疫組化法檢測脾臟組織mPD-1、mPD-L1的蛋白表達，使用Elisa雙抗夾心法檢測血清和滑膜液sPD-1、sPD-L1的含量，采用S-P免疫組化法檢測滑膜組織中NF-κBp65、IKKβ的蛋白表達。
　　結果：<

4、br>　　1．艾灸可以明顯改善RA家兔全身狀況和關節(jié)滑膜炎癥病理變化，顯著降低膝關節(jié)腫脹。
　　2．滑膜液T細胞促炎因子含量檢測結果顯示：與對照組比較，模型組IL-2、IFN-γ、IL-17含量均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，治療組IL-2、IFN-γ、IL-17含量均明顯降低(P<0.05)。
　　3．血清中T細胞識別信號轉導激活的相關分子檢測結果顯示：與對照組比較，模型組血清中p56lck、p59fyn含量均明

5、顯升高(P<0.05)；與模型組比較，治療組血清中p56lck、p59fyn含量均明顯降低(P<0.05)。
　　4．脾臟組織中mPD-1、mPD-L1表達檢測結果顯示：與對照組比較，模型組mPD-1、mPD-L1的蛋白表達均明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，治療組mPD-1表達有上升趨勢(P>0.05)，mPD-L1表達明顯升高(P<0.05)。
　　5．血清和滑膜液中sPD-1、sPD-L1表達檢測結果顯示：與對照

6、組比較，模型組血清和滑膜液sPD-1和sPD-L1含量均明顯升高(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，治療組血清和滑膜液sPD-1含量均明顯降低(P<0.05)，血清和滑膜液sPD-L1均呈下降趨勢，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　6．滑膜組織中NF-κB通路相關分子檢測結果顯示：與對照組比較，模型組滑膜組織中NF-κBp65、IKKβ的蛋白表達均明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，艾灸組NF-κBp65和IKKβ