脊髓P2X7受體在蜜蜂毒誘致的疼痛與炎癥中的作用研究.pdf

1、研究背景：既往三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate ATP)一直只被認為是體內的一種儲能和供能物質。自“嘌呤能神經(jīng)學說”提出后，ATP被認為是普遍存在于周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種神經(jīng)遞質，而此類神經(jīng)遞質結合的受體稱為嘌呤能受體(Purinergic receptors)，可分為離子通道型P2X受體和代謝型P2Y受體，P2X7受體是嘌呤能P2X受體家族成員之一。最初，P2X7受體被稱之為P2Z受體，屬于配體門控型非選擇性

2、離子通道，因其獨特的結構、功能和分布特點，在炎癥(inflammation)和疼痛(pain)中發(fā)揮著作用。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)，利用蜜蜂毒致痛模型，我們可觀察到大鼠注射的后足有明顯的紅、腫、熱等炎癥反應，并且產(chǎn)生了持續(xù)性自發(fā)痛反應(persistent spontaneous nociception PSN)和機械痛敏反應(mechanicalhyperalgesia)。近幾年來，有研究表明脊髓P2X7受體在炎癥和疼痛中扮演重要角色。<

3、br>　　 目的：我們目前的實驗主要通過鞘內預先給予P2X7受體拮抗劑A430789、膠質細胞代謝抑制劑氟代檸檬酸(fluorcitrate Flu)及同時給予兩種藥物，觀察這些處理對一側大鼠后肢足底皮下注射蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛反應、機械性痛敏以及炎癥反應的影響，用以探討脊髓水平P2X7受體在蜜蜂毒誘致的疼痛和炎癥中的作用，以及可能的機制。這些研究可能會為臨床的疼痛和炎癥治療提供新的作用靶點，為鎮(zhèn)痛和抗炎的藥物開發(fā)提供了新的思路。

4、
　　 材料和方法：應用蜜蜂毒(bee venom BV)作為化學致痛劑足底皮下注射模型來研究P2X7受體拮抗劑A430789、膠質細胞代謝抑制劑氟代檸檬酸及同時給予兩種藥物在大鼠的持續(xù)自發(fā)痛反應、機械性痛敏及炎癥反應中的作用。實驗采用雄性健康的SD大鼠，體重200-300克。本實驗的給藥方式為鞘內注射，實驗組分別預先20分鐘在鞘內置管大鼠的PE管中注入不同劑量的P2X7受體拮抗劑A430789、膠質細胞代謝抑制劑氟代檸檬酸及同

5、時給予兩種藥物。對照組為注射溶媒(10μl/只，DMSO:PBS=3:7)。蜜蜂毒注射后首先觀察大鼠在蜜蜂毒注射后1個小時內的自發(fā)痛行為（縮足反射），每5分鐘為一個計時點。置PE管前、蜜蜂毒注射前及注射后2小時用electronic von Frey檢測注射側鼠爪的機械刺激反應閾值(paw withdrawalmechanical threshold PWMT)以及應用PU PAWVOLUM容積測量儀測量置PE管前、蜜蜂毒注射前及注射后

6、2小時注射側鼠爪體積。
　　 結果：
　　 (1)對自發(fā)痛的影響：與對照組相比，預先鞘內給予P2X7受體拮抗劑A430789呈劑量依賴性地抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的自發(fā)縮足反應；膠質細胞代謝抑制劑氟代檸檬酸也明顯抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的自發(fā)縮足反應。然而同A430789組(10μg)相比，同時給予A430789(10μg)和氟代檸檬酸(10nmol)不但沒有進一步增強A430789的抑制效應，反而部分翻轉了其抑制效應。
　　

7、(2)對痛敏的影響：與對照組相比，預先鞘內給予P2X7受體拮抗劑A430789抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的機械性痛敏，且呈劑量依賴性。膠質細胞代謝抑制劑氟代檸檬酸也明顯抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的機械性痛敏。然而同A430789組(10μg)相比，同時給予A430789(10μg)和氟代檸檬酸(10nmol)沒有進一步增強A430789的抑制效應。
　　 (3)對炎癥的影響：與對照組相比，預先鞘內給予不同劑量的P2X7受體拮抗劑A430789對蜜蜂

8、毒誘發(fā)的鼠爪體積增加均沒有影響。膠質細胞代謝抑制劑氟代檸檬酸對蜜蜂毒誘發(fā)的鼠爪體積增加也沒有影響。進一步同A430789組(10μg)相比，同時鞘內給予A430789(10μg)和氟代檸檬酸(10nmol)對蜜蜂毒誘發(fā)的鼠爪體積增加也沒有影響。
　　 結論：
　　 (1)脊髓水平膠質細胞的嘌呤能P2X7受體參與了蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛反應。
　　 (2)脊髓水平膠質細胞的嘌呤能P2X7受體在蜜蜂毒誘致的機械性痛