生鮮乳及乳制品中甾類激素殘留分析方法研究.pdf

1、牛奶及其相關乳制品中含有豐富的營養(yǎng)物質，如各類蛋白質、微量元素、多種維生素、鈣類以及其它人體所必需的營養(yǎng)物質，因而受到大眾群體的喜愛，尤其是對處于嬰幼兒及學齡期的孩子。但近年來屢次發(fā)生的乳品質量安全事件，不僅危害了消費者的利益，還造成奶農的巨大經(jīng)濟損失，嚴重危害了我國奶業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。2013年發(fā)生的圣元奶粉導致嬰幼兒性早熟事件，再次將乳品質量安全，特別是激素殘留水平提到新的認識高度?？茖W的合理評估乳及乳制品中激素殘留水平對保障我國奶

2、業(yè)健康發(fā)展至關重要。甾類激素作為人體內痕量存在的物質，對人類健康具有舉足輕重的作用，缺少和超量都會影響身體健康。本研究以13種甾類激素為目標物質，分別建立了乳品中甾類激素高效液相色譜法及超高效液相色譜串聯(lián)飛行時間質譜法。利用建立的分析方法測定了生鮮牛乳及乳制品中甾類激素殘留。論文主要研究內容與結果如下：
　　（1）建立了生鮮牛乳及奶粉中4種雌激素（17β-雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚）的高效液相色譜分析方法。該方法用QuEChE

3、RS方法萃取，乙腈提取并沉淀蛋白質，正己烷除脂，氨基固相萃取柱（SPE）凈化，反相色譜柱C18柱分離，最后紫外230nm處測定。該方法對生鮮牛乳及奶粉中17β-雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚的檢出限（以S/N=3計）分別為0.03、0.026、0.03、0.012mg/kg和0.024、0.021、0.025、0.01mg/kg。定量限（以S/N=10計）分別為0.1、0.09、0.1、0.04 mg/kg和0.07、0.07、0.08

4、、0.03mg/kg；在0.1、1.0、2.0 mg/kg三個濃度水平進行添加，平均回收率在81％-97%的范圍內，RSD值在3.2%-8.7%之間。
　?。?）對QuEChERS方法中提取和凈化條件進行了優(yōu)化：質譜分析易受基質效應的影響，因此提取和凈化條件非常重要。本研究比較了甲醇、乙腈、乙酸乙酯和丙酮的提取效果，結果表明，乙腈的提取效果最好，回收率最高，且牛乳中的蛋白質可以得到有效沉淀。因此確定乙腈為提取劑。深入探討了三種填料

5、PSA、GCB和酸性氧化鋁對樣品回收率和基質效應的影響，以優(yōu)化凈化條件，選擇無水硫酸鎂900mg、PSA150mg、酸性氧化鋁200mg，由此可得最優(yōu)化實驗結果。
　?。?）建立了生鮮乳中13種甾類激素（17β-雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚、醋酸美倫孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、去氫睪酮、去氫甲睪酮、19-去甲睪酮、睪酮、表睪酮、孕酮）的UPLC-Q-TOF-MS的分析方法。采用優(yōu)化后的QuEChERS方法對生鮮乳樣品中的甾

6、類激素提取及凈化。經(jīng)ACQUITY UPLC BEH C18（2.1×100mm1.7μm）色譜柱分離，采用電噴霧離子源正、負離子模式分別掃描，13種甾類激素在0.001-0.5mg/kg具有良好的線性關系；該方法對生鮮乳中13種甾類激素的檢出限為0.07μg/kg-0.51μg/kg（S/N=3）；定量限（S/N=10）為0.23μg/kg-1.7μg/kg。應用基質外標法測定13種甾類激素的添加回收率和精密度，平均回收率為71.2%

7、-121.6%，RSD為2.3%-18.6%。建立了13種甾類激素質譜數(shù)據(jù)庫，得到了子離子碎片結構，便于陽性樣品的進一步確證。
　?。?）不同地區(qū)不同季節(jié)生鮮乳及市場上乳制品中中甾類激素含量水平的分析及對比：2013年至2015年，每年于春、夏、秋、冬四個季度分別在山東省濰坊市、四川省成都市、陜西省西安市采集30份生鮮牛乳和生鮮羊乳樣品，廣西省南寧市采集30份生鮮水牛乳樣品。使用前述方法分析樣品中甾類激素的含量水平。結果表明，孕酮

8、在生鮮牛乳和生鮮水牛乳中檢出較高，平均檢出率為90.2%，含量范圍為未檢出～9.06μg/kg。生鮮羊乳平均檢出率為74.2%，含量范圍為未檢出～6.36μg/kg。雌酮在生鮮牛乳和生鮮水牛乳中檢出較低，均低于40%，含量范圍為未檢出～4.13μg/kg。其它甾類激素均未檢出。夏冬季的生鮮牛乳樣品當中孕酮含量略高于春秋季；地域對生鮮乳當中的甾類激素的水平含量的影響并不大，各省份的孕酮含量差異在1μg/kg左右。選取六種市場上常見品牌的直