雙組分系統(tǒng)HPK1-RR1耐酸調(diào)控基因鑒定.pdf

1、德氏乳桿菌保加利亞亞種（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）廣泛應用于各種乳制品的制作過程中，是發(fā)酵酸奶過程中必不可少的菌株。乳酸菌在自身的生長或發(fā)酵過程中，其代謝過程都會產(chǎn)生乳酸，對菌體自身生長產(chǎn)生抑制作用。因此該菌的耐酸能力的研究十分重要。
　　細菌在經(jīng)過酸誘導后，其耐酸能力會大幅度提高，細菌生理會發(fā)生較大變化。在適應低pH值的過程中，細菌的生理發(fā)生利于細菌生存能力提高的改變。

2、酸誘導條件可以更好的模擬菌體受到外界低pH影響時的酸耐受反應（acid tolerance response，ATR），從而可以更全面揭示在受到酸誘導后，細菌生存能力提高過程中可能參與的基因。因此，本研究選擇在酸誘導后，研究野生型CH3、突變體CH3-H、突變體CH3-R在72個特定基因表達量方面的差異，經(jīng)過本實驗數(shù)據(jù)結果自身比較并結合本實驗室前期研究自然發(fā)酵條件下的實驗數(shù)據(jù)，研究雙組分系統(tǒng)HPK1/RR1激活或抑制表達的基因。

3、　　酸誘導處理后，HPK1突變體CH3-H、RR1突變體CH3-R相比于野生型CH3菌株有多個基因表達量出現(xiàn)變化，主要涉及細胞分裂及細胞膜、信號轉導、丙酮酸和乙酰輔酶A代謝、脂質(zhì)代謝、多肽轉運及降解、分子伴侶、質(zhì)子泵等。其中信號轉導、丙酮酸和乙酰輔酶A代謝中的多個基因表達量變化，推測突變后可能影響了信號傳遞過程及菌體產(chǎn)能，導致菌體生長緩慢。通過與本實驗前期結果進行比較，相比于正常發(fā)酵情況下，酸誘導后下野生型CH3菌株、HPK1突變體、R

4、R1突變體也出現(xiàn)多個基因表達量變化，且相比于自然發(fā)酵條件下變化的基因更多，推測是酸誘導表達的結果。綜合以上結果，表明雙組分信號轉導系統(tǒng)HPK1/RR1對德氏乳桿菌保加利亞亞種CH3的耐酸調(diào)控是通過對多個代謝途徑進行綜合調(diào)節(jié)實現(xiàn)的。
　　本實驗對cDNA-AFLP技術進行了摸索，已經(jīng)確定了實驗條件。采用該技術篩選HPK1/RR1參與的德氏乳桿菌保加利亞亞種酸調(diào)控過程中的未知基因進行了初步的探索，后期可進行cDNA-AFLP技術篩選未