LBH589體外增強TRAIL誘導Kasumi-1細胞凋亡及其機制的研究.pdf

1、研究背景:腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(tumor necrosis factor relatedapoptosis inducing ligand，TRAIL，Apo-2L)是TNF超家族成員之一，通過與其特異性死亡受體(DR4，DR5)結合而激活凋亡信號轉導途徑，選擇性誘導多種腫瘤細胞及轉化細胞凋亡，而對正常細胞無殺傷作用。盡管TRAIL已被證實能殺傷白血病細胞而不影響正常宿主細胞，但某些腫瘤細胞對TRAIL誘導的凋亡有耐受性，需要

2、其它化療藥物來促進其對TRAIL的敏感性，這嚴重影響TRAIL的臨床應用，為治療帶來巨大挑戰(zhàn)。因此，尋找能增強TRAIL誘導白血病細胞凋亡的藥物可以提高其臨床應用前景。
　　組蛋白的乙?；兔撘阴；谡{節(jié)基因表達方面起著重要作用，并且組蛋白脫乙?；?histone deacetylases，HDACs)和組蛋白乙酰轉移酶(histone acetyl ases，HATs)的活性與腫瘤的發(fā)生有關。組蛋白脫乙?；敢种苿╤isto

3、ne deacetylaseinhibitors，HDACIs）可以抑制組蛋白脫乙?；?，促進組蛋白乙酰化，調節(jié)染色質結構和基因轉錄，表現(xiàn)出抗增殖、促進分化、誘導凋亡等作用。研究表明HDACIs與多種藥物聯(lián)合應用，可能產生協(xié)同抗腫瘤效應，成為一類新的吸引人的治療AML、ALL及MDS等血液系統(tǒng)疾病的藥物。Panobinostat(LBH589)是一種小分子的HDACIs，為異羥肟酸（氧肟酸）類，能阻斷癌癥和與癌癥發(fā)生有關的多種病理通路，

4、降低癌細胞的存活，誘導癌細胞的凋亡。有報道，LBH589能增強組蛋白H3、H4乙?；胶头墙M蛋白乙?；?，在白血病細胞中，能減弱信號蛋白磷酸化，以劑量依賴的形勢誘導凋亡。
　　急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是臨床常見的一類疾病，其社會危害大，伴t(8;21)陽性AML占全部AML患者的10％-15％，被認為是一種預后良好的類型，但復發(fā)和耐藥仍然威脅患者長期生存，接近50％的病人復發(fā)，且其

5、發(fā)病年齡輕，社會危害更為顯著。Kasumi-1細胞是培養(yǎng)自人t(8;21)急性髓系白血病患者的細胞系，為研究此類白血病的良好模型，本研究旨在探討rsTRAIL聯(lián)合LBH589體外誘導Kasumi-1細胞凋亡的作用，為此類患者尋找新的治療方法。
　　第一部分 LBH589體外增強rsTAIL誘導Kasumi-1細胞凋亡
　　目的:觀察rsTRAIL、LBH589在體外單獨及其聯(lián)合誘導Kasumi-1細胞凋亡的作用。
　　

6、方法:采用Wright染色法觀察rsTRAIL單藥、LBH589單藥及二者聯(lián)合作用于Kasumi-1細胞后，細胞形態(tài)改變;采用WST-8(CCK-8)比色法測定rsTRAIL單藥、LBH589單藥及二者聯(lián)合應用對Kasumi-1細胞的生長抑制作用;用流式細胞術檢測rsTRAIL單藥、LBH589單藥及二者聯(lián)合作用于Kasumi-1細胞后細胞的凋亡率。
　　結果:(1) rsTRAIL和LBH589在體外單用應用均可抑制Kasumi

7、-1細胞的生長，10nM和50nM LBH589分別與不同濃度rsTRAIL聯(lián)合用藥可增加對Kasumi-1細胞的生長抑制率，且呈時間和劑量依賴性(P＜0.05)。
　　(2)rsTRAIL(10ng/mL)和LBH589(50nM)在體外單藥及聯(lián)合作用于Kasumi-1細胞，AnnexinⅤ陽性細胞百分率分別為(26.03±2.48)％、(24.99±4.11)％及(66.01±7.15)％，與對照組(7.34±7.15)％相比

8、，差異顯著(P＜0.001)。
　　結論:LBH589在體外具有增強rsTRAIL誘導Kasumi-1細胞凋亡的作用。
　　第二部分 LBH589體外增強rsTAIL誘導Kasumi-1細胞凋亡機制的研究
　　目的:探討rsTRAIL、LBH589在體外單獨及其聯(lián)合誘導Kasumi-1細胞凋亡作用的機制。
　　方法:采用實時定量PCR法檢測不同濃度LBH589作用于Kasumi-1細胞，經不同作用時間后TRAIL

9、受體DR4、DR5、DcR1及DcR2基因水平變化;Western blot法檢測rsTRAIL、LBH589單獨及聯(lián)合作用于Kasumi-1細胞后，DR4、caspase-3、caspase-9、Bax、Bid及Bcl-2的變化。
　　結果:(1)實時定量PCR法檢測發(fā)現(xiàn)LBH589可以上調死亡受體DR4的表達。
　　(2) Western blot法檢測發(fā)現(xiàn)LBH589單獨及其聯(lián)合rsTRAIL應用能上調DR4的表達，激