MPTP誘導(dǎo)小鼠帕金森病模型中,CLK1參與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活及神經(jīng)毒性的研究.pdf

1、目的：研究clk1對(duì)MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型中神經(jīng)元損傷以及膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響及其機(jī)制。
　　方法：野生型和clk1缺失型C57BL小鼠（Mclk1+/-)采用亞急性帕金森病模型（MPTP，30mg/kg，5天)，利用行為學(xué)檢測(cè)，免疫組化和Western blotting方法分別檢測(cè) MPTP模型后小鼠的行為學(xué)改變、腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元損傷及多黑質(zhì)部位膠質(zhì)細(xì)胞激活情況；體外原代培養(yǎng)星型膠質(zhì)細(xì)胞 LPS/IFN-γ刺激，運(yùn)用 R

2、eal-time PCR，ELISA，NO assay方法檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞激活情況，同時(shí)采用熒光探針DCFH-DA和JC-1分別檢測(cè)原代星型膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生和線粒體膜電位的變化；利用LPS/IFN-γ刺激后的原代星型膠質(zhì)細(xì)胞上清與神經(jīng)元共培養(yǎng)，觀察原代星型膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元的神經(jīng)毒性作用；最后利用Western blotting檢測(cè)腦組織和體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)HIF-1α蛋白水平表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：基礎(chǔ)條件下，與野生型比

3、較，Mclk1+/-小鼠在行為學(xué)表現(xiàn)，多巴胺能神經(jīng)元損傷，膠質(zhì)細(xì)胞激活狀態(tài)及膠質(zhì)細(xì)胞線粒體功能方面無明顯差異，但是在MPTP模型后，與野生型相比，Mclk1+/-小鼠爬桿時(shí)間顯著延長(zhǎng)，轉(zhuǎn)棒運(yùn)動(dòng)時(shí)間顯著縮短；免疫組織熒光化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)中腦黑質(zhì)部位TH陽性細(xì)胞數(shù)量顯著減少以及鄰近的GFAP和Iba1陽性細(xì)胞激活水平顯著升高；體外原代培養(yǎng)的Mclk1+/-小鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞在LPS/IFN-γ刺激后，TNF-α，NO的釋放和ROS生成顯著增加；線

4、粒體膜電位檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，LPS/IFN-γ刺激后，星型膠質(zhì)細(xì)胞線粒體膜電位顯著降低；膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基與神經(jīng)元共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Mclk1+/-小鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元的損傷作用加??；在炎癥環(huán)境中，與野生型相比，clk1缺失可明顯升高腦內(nèi)和星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)HIF-1α的表達(dá)。
　　結(jié)論：1.clk1缺失小鼠對(duì)MPTP誘導(dǎo)中腦多巴胺能神經(jīng)損傷更敏感。2.星型膠質(zhì)細(xì)胞過度激活參與clk1缺失小鼠對(duì)MPTP誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷的敏感性。3.clk1缺