人胃癌組織甲基化相關(guān)基因與腫瘤相關(guān)基因的關(guān)系.pdf

1、目的:胃癌是中國(guó)常見的惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參加的多步驟過程.DNA甲基化在基因表達(dá)調(diào)控中具有重要的作用,腫瘤組織多有DNA甲基化的紊亂,包括與細(xì)胞增殖周期密切相關(guān)的癌基因低甲基化和抑癌基因高甲基化等.理論上,包括DNA甲基化酶(DNA methyltransferase,Dnmt)、DNA去甲基化酶(DNA demethylase,主要是mbd2)和甲基化結(jié)合蛋白(methyl-CpG binding protein,MBD

2、;以MeCP2為最重要)等DNA甲基化相關(guān)基因可以影響腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)與活性,但迄今為止尚缺乏有關(guān)的研究證據(jù).hMSH2是目前研究較廣泛的DNA錯(cuò)配修復(fù)基因,它的失活可導(dǎo)致DNA錯(cuò)配修復(fù)能力的降低,引起微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability,MSI),可使癌基因激活或抑癌基因失活,誘發(fā)細(xì)胞癌變.現(xiàn)已發(fā)現(xiàn),癌發(fā)生過程中導(dǎo)致錯(cuò)配修復(fù)基因失活的另一方式為DNA甲基化的改變,這種改變常伴有錯(cuò)配修復(fù)基因表達(dá)的丟失.

3、該研究的主要目的是闡明人胃癌組織中Dnmtl、mbd2和MeCP2及腫瘤相關(guān)基因p16<'INK4A>、c-myc、hMSH2的表達(dá)及其相關(guān)性,腫瘤相關(guān)基因的甲基化調(diào)控情況,同時(shí)也分析了以上各種基因的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系.方法:收集28例組織學(xué)確診為胃癌的手術(shù)患者,取其癌、相應(yīng)癌旁、正常組織的粘膜組織.提取總RNA和DNA.以real-time RT-PCR法檢測(cè)Dnmtl、hMSH2的mRNA表達(dá)情況、以RT-PCR法測(cè)定mbd

4、2、MeCP2、抑癌基因p16<'INK4A>、癌基因c-myc等基因的轉(zhuǎn)錄水平.通過亞硫酸氫鹽修飾和測(cè)序的方法檢測(cè)錯(cuò)配修復(fù)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的情況;以甲基化特異性的PCR法檢測(cè)相關(guān)癌基因、抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況.最后以相關(guān)分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)處理研究各基因之間及分別與病理組織學(xué)之間的關(guān)系.結(jié)論:我們的研究結(jié)果表明MeCP2和mbd2在正常組織中其維持甲基化作用和去甲基化作用是相互制約的.而在胃癌發(fā)生中mbd2的活性降低,這在一定程度上與D