散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤的流行病學(xué)研究以及與COL1A2、COL4A1、TNFRSF13B基因和微衛(wèi)星位點D7S2421單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性分析.pdf

1、目的:顱內(nèi)動脈瘤(intracranial aneurysm，IA)主要是由動脈管壁局部缺陷和管腔內(nèi)壓力增高而發(fā)生。其破裂可引起的蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)，發(fā)病率為18-23/10萬，在腦血管意外病人中占第三位，僅次于腦血栓和高血壓腦出血。顱內(nèi)動脈瘤可以發(fā)生于任何年齡，兒童及青年發(fā)病較少，多在40-60歲之間。另外，顱內(nèi)動脈瘤患者女性略多于男性，絕經(jīng)后女性發(fā)病率高于絕經(jīng)前女性。吸煙，酗酒，

2、高血壓，高血脂，高血糖均是顱內(nèi)動脈瘤的危險因素。動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血是一種高致殘率和高死亡率疾病，約12％病人在接受治療前就死亡，40％住院病人死于出血后一個月內(nèi)，大于1/3的患者遺留有嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙，只有少部分預(yù)后較好。尸體解剖和血管造影的研究評估未破裂動脈瘤的發(fā)生率為2.7-6.5％。
　　 流行病學(xué)調(diào)查顯示，部分顱內(nèi)動脈瘤患者呈現(xiàn)家族性發(fā)病傾向，同時還發(fā)現(xiàn)顱內(nèi)動脈瘤可與免疫性疾病、遺傳性結(jié)締組織病、系統(tǒng)性疾病并發(fā)，說

3、明遺傳因素在顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)生中起著重要作用。在發(fā)病學(xué)上顱內(nèi)動脈瘤被認(rèn)為是多種遺傳因素和多種環(huán)境因素共同作用的多基因疾病，情形復(fù)雜不易掌控，因其既不符合常染色體顯性遺傳和隱性遺傳，也不符合X連鎖遺傳，基因定位結(jié)果往往差異較大，因此對顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)病機(jī)理尚不十分清楚，增加了針對病因治療的難度。目前多基因疾病的遺傳學(xué)研究主要是連鎖分析和關(guān)聯(lián)研究，關(guān)聯(lián)研究又分為等位基因關(guān)聯(lián)和連鎖不平衡分析。隨著近年人類基因組完整序列的成功獲取、國際人類基因組單

4、體型圖計劃的實施、大量單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNP)標(biāo)記的使用以及基因芯片和微陣列的快速發(fā)展和應(yīng)用，進(jìn)一步促進(jìn)了對DNA變異的分析和對大多數(shù)多基因疾病易感基因的定位和克隆的研究。因易感基因的特點是基因的變異本身并不直接導(dǎo)致疾病的發(fā)生，只是造成機(jī)體患病的潛在危險性增加，一旦外界有害因素介入，即可導(dǎo)致疾病，故易感基因的定位意義重大。眾多國內(nèi)外學(xué)者利用各種研究方法，先后檢測出了顱內(nèi)動脈

5、瘤的易感基因，共十余種之多，包括膠原基因、腫瘤壞死因子受體基因、彈力蛋白基因等，并進(jìn)行了定位。但是在不同種族、不同民族及不同人群中的研究報告并不一致，存在巨大差異，甚至是相反結(jié)論，從此可以看出顱內(nèi)動脈瘤病因的不定性。迄今能揭示多基因改變與一些疾病如心臟疾患、糖尿病、哮喘及精神分裂等易感性聯(lián)系的，非SNP莫屬，并具有快速、高效、準(zhǔn)確等特點，有著良好廣闊的發(fā)展前景。因此，尋找和研究SNP已成為人類基因組計劃的內(nèi)容和目標(biāo)，發(fā)現(xiàn)這些與常見疾病相

6、關(guān)的DNA序列上的多態(tài)位點，是了解引起人類疾病復(fù)雜原因的最重要途徑之一。隨著分子遺傳學(xué)的不斷發(fā)展，各種研究手段的應(yīng)用使得能夠在最大限度范圍內(nèi)找到包括顱內(nèi)動脈瘤在內(nèi)的多基因疾病的發(fā)病機(jī)制成為可能，從而為顱內(nèi)動脈瘤易感基因的確定，易感人群的篩選，早期診斷和治療提供了分子學(xué)基礎(chǔ)，對于不斷提高疾病檢出率，提高患者生存率和生存質(zhì)量，具有重要的意義。
　　 方法:
　　 1、散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤流行病學(xué)研究
　　 應(yīng)用病例對照

7、研究，對100例散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤患者及116例對照者進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，采用卡方檢驗及多元Logistic回歸分析方法進(jìn)行各相關(guān)危險因素的多因素分析。
　　 2、COL1A2、COL4A1、TNFRSF13B基因及微衛(wèi)星位點D7S2421的單核苷酸多態(tài)性與散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤的關(guān)聯(lián)分析
　　 隨機(jī)篩選100例無親緣關(guān)系的散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤患者和116例無親緣關(guān)系的對照者，提取靜脈血全基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性酶

8、切片段長度多態(tài)性方法，檢測COL1A2基因SNp rs42524 G＞C，COL4A1基因SNP rs3783107C＞T，TNFRSF13B基因SNP rs11078355G＞A及微衛(wèi)星位點D7S2421 SNPrs6465976of G＞A四個功能性位點基因型頻率的組間差異，應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，檢驗各基因與散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤之間的相關(guān)性。
　　 3、東北地區(qū)散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤患者COL1A2、COL4A1

9、、TNFRSF13B基因及微衛(wèi)星位點D7S2421單核苷酸多態(tài)性的臨床意義
　　 隨機(jī)篩選100例無親緣關(guān)系的散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤患者，提取靜脈血全基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性酶切片段長度多態(tài)性(Polymerase chainreaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法，結(jié)合臨床特點，對COL1A2基因SNP rs42524 G＞C，COL4

10、A1基因SNP rs3783107 C＞T，TNFRSF13B基因SNP rs11078355G＞A及微衛(wèi)星位點D7S2421 SNP rs6465976ofG＞A進(jìn)行基因型頻率分析，并進(jìn)行卡方檢驗(chi square test，x2test)，計算P值(P va1ue)，比值比(odds ratio，OR)及95％可信區(qū)間(95％confidence interval，95％CI)，分析散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤臨床特點與上述各基因單核苷酸

11、多態(tài)性的相互關(guān)系。
　　 結(jié)論:
　　 1、散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤好發(fā)于40_59歲之間；女性、吸煙、空腹血糖增高及高血壓是顱內(nèi)動脈瘤發(fā)生及發(fā)展的危險因素。
　　 2、COL1A2基因SNP rs42524 G＞C與TNFRSF13B基因SNP rs11078355G＞A與中國東北地區(qū)散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤具有明顯相關(guān)性，COL1A2基因和TNFRSF13B基因是散發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤的候選易感基因。
　　 3、在散

12、發(fā)顱內(nèi)破裂動脈瘤患者中：
　　 (1)COL1A2基因SNP rs42524 G＞C的等位基因C有可能提高患者的Hunt&Hess分級，可能是加重顱內(nèi)破裂動脈瘤患者病情的重要危險因素。
　　 (2)COL4A1基因SNP rs3783107 C＞T的等位基因T有可能是在高血壓患者中導(dǎo)致顱內(nèi)動脈瘤的危險因素，同時還有可能提高患者的Fisher分級程度。
　　 (3)TNFRSF13B基因SNP rs11078355