大鼠主動脈衰老進程的比較蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、目的:研究老年大鼠主動脈與衰老相關(guān)的蛋白質(zhì)，為進一步探討衰老機制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:將24只雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠和自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)分別隨機分成2組，每組6只，共4組:WKY成年組（9周），WKY老年組(12月)，SHR成年組（9周），SHR老年組（12月）。實驗中4組大鼠飼養(yǎng)條件均相同，每隔4周測量大鼠的血壓和體量，采用尾動脈間接法測量所有大鼠的收縮壓(SBP)，連測3次取平均值，觀察各組大鼠

2、的血壓和體重變化情況。成年組和老年組分別在飼養(yǎng)至9周與12月時以相同方式處死，分離主動脈留取標本并提取蛋白。采用蘇木精-伊紅(HE)染色觀察各組主動脈的形態(tài)學改變，運用同位素標記相對和絕對定量（isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation，iTRAQ）多重化學標記串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)和Mascot數(shù)據(jù)庫檢索鑒定差異蛋白，同時采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)檢測了前層蛋白A(Prelamin-

3、A)與抑制素蛋白(Prohibitin)的mRNA表達水平，采用免疫印跡技術(shù)(Westem-blot)檢測了前纖維蛋白1（Profilin-1）的蛋白表達水平。
　　 結(jié)果:老年組中SHR大鼠的平均收縮壓明顯高于WKY大鼠(P＜0.05);成年組中SHR大鼠的平均收縮壓也高于WKY大鼠(P＜0.05);且老年組SBP的差值明顯大于成年組。此外，WKY大鼠的體重顯著大于同周齡的SHR大鼠(P＜0.05)。HE染色顯示老年組的WKY

4、和SHR大鼠主動脈出現(xiàn)衰老改變，且SHR老年組更明顯。質(zhì)譜分析鑒定了7個與衰老相關(guān)的差異蛋白，分別是:Profilin-1、Prelamin-A、熱休克蛋白70(HSP70)、肌酸激酶M(CK-M)、腓骨蛋白5(Fibulin-5)、真核翻譯起始因子5A-1(eIF5A)、Prohibitin。其中Profilin-1、Prelamin-A2個蛋白表達上調(diào)，HSP70、CK-M、Fibulin-5、elF5A、Prohibitin5個蛋

5、白表達下調(diào)。實時定量PCR結(jié)果顯示，與成年組相比，WKY與SHR老年組中Prelamin-A的mRNA表達均升高，分別為0.45±0.04與0.15±0.009、0.78±0.06與0.34±0.02（t值分別為12.67、12.06，均P＜0.01）。與成年組相比，WKY與SHR老年組中Prohibitin的mRNA表達均降低，分別為1.01±0.062與1.34±0.046、0.88±0.075與1.24±0.046（t值分別為7.

6、41、7.09，均P＜0.01）。Western-blot檢測結(jié)果顯示，與成年組相比，WKY與SHR老年組中Profilin-1的蛋白表達均升高，分別為20.76±0.8與9.12±0.4、55.16±0.9與16.84±0.5(t值分別為22.55、64.46，均P＜0.01)，且Profilin-1在SHR老年組的蛋白表達比WKY老年組的高，分別為55.16±0.9與20.76±0.8（t值為49.49，P＜0.01）。