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1、酵母雙雜交技術(shù)自創(chuàng)立以來已成為研究蛋白之間相互作用的重要方法。傳統(tǒng)的酵母雙雜交所研究的蛋白間相互作用是在細(xì)胞核內(nèi)完成的,而近年來發(fā)展起來的酵母雙雜交衍生系統(tǒng)---Ras募集系統(tǒng)(RRS),能夠?qū)⒌鞍组g相互作用的研究定位在細(xì)胞膜上,更具備了靈敏度高、假陽性少等突出優(yōu)點(diǎn)。在本研究中,我們利用了一對已知蛋白之間的相互作用來驗(yàn)證RRS篩選系統(tǒng),以期將此篩選系統(tǒng)更廣泛地運(yùn)用于其他蛋白間相互作用的研究以及相互作用蛋白的釣取。 輪狀病毒(RV
2、)腸炎及其腸道外并發(fā)癥是威脅兒童健康的重要疾病。RV 與其宿主細(xì)胞表面受體的結(jié)合是病毒感染的第一必備步驟,因此,明確RV受體性質(zhì),對該病的預(yù)防和治療有十分重要的意義?,F(xiàn)有研究提示,RV外殼蛋白VP4是病毒吸附受體的主要配體蛋白。在本研究中,我們采用 RT-PCR法擴(kuò)增RV外殼蛋白VP4編碼基因并將其克隆到Met425-Myc-Ras載體上,構(gòu)建成適合于RRS篩選系統(tǒng)的誘餌質(zhì)粒并排除了誘餌的自激活作用,表明我們可以將該誘餌質(zhì)粒用于RRS篩
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