多巴胺D-,3-受體對(duì)血管平滑肌胰島素受體的影響在高血壓發(fā)生中的作用研究.pdf

1、一、研究背景
　　 近年來(lái),胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)在高血壓(Essential hypertension,EH)的發(fā)病機(jī)理中作用日益受到關(guān)注,50％左右的EH患者存在不同程度的IR。IR患者體內(nèi)伴有代償性高胰島素血癥。在IR和高胰島素血癥引起EH的眾多病理生理改變中,血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)異常增殖尤為引人注目,它通過(guò)引起阻力血管收縮

2、力增加、順應(yīng)性下降、血管壁硬化、外周血管阻力增加參與高血壓發(fā)生發(fā)展。胰島素作為一種體液因子,與VSMCs增殖和凋亡密切相關(guān),胰島素可通過(guò)胰島素受體底物磷酸化,進(jìn)而激活一系列信號(hào)途徑直接刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖,亦可通過(guò)血管緊張素、胰島素生長(zhǎng)因子Ⅰ等促血管增殖因子間接發(fā)揮作用。此外在EH的病人中,胰島素水平升高和VSMCs過(guò)度增殖亦呈正相關(guān)。我們既往的研究已證實(shí)胰島素對(duì)VSMCs具有直接促增殖作用,該作用呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　 多巴

3、胺系統(tǒng)在血壓調(diào)節(jié)中的作用逐漸受到重視。多巴胺受體隸屬G蛋白偶聯(lián)受體,根據(jù)其結(jié)構(gòu)和藥理學(xué)特性不同分為兩類,即D1類受體(包括D1和D5)和DE類(包括D2、D3、D4)受體亞型。多巴胺受體的利鈉排尿作用已得到基因敲除小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果的支持,多巴胺受體的5個(gè)亞型,無(wú)論敲除何種受體亞型均引起基因敲除小鼠血壓明顯增高,D1、D3、D5受體基因敲除小鼠伴有尿鈉排泄功能障礙。D3多巴胺受體作為D2類多巴胺受體主要亞型,在腎臟及動(dòng)脈系統(tǒng)均有表達(dá),起著舒張

4、血管、利鈉排尿的作用。我們以往的研究工作發(fā)現(xiàn)D1類以及D3受體本身對(duì)VSMCs增殖并無(wú)影響,但刺激這些受體可抑制去甲腎上腺素對(duì)VSMCs的促增殖作用。胰島素受體參與血管平滑肌細(xì)胞增殖已得到公認(rèn),多巴胺D3受體與胰島素受體共存于血管平滑肌細(xì)胞,D3受體對(duì)血管平滑肌上胰島素受體的功能和表達(dá)是否存在影響?通過(guò)何種機(jī)制發(fā)揮作用?結(jié)合我們既往的研究,我們推測(cè):多巴胺D3受體對(duì)胰島素受體表達(dá)有調(diào)節(jié)作用,并參與胰島素受體介導(dǎo)的促VSMCs增殖過(guò)程。<

5、br>　　 二、研究目的
　　 主要從細(xì)胞水平明確D3受體對(duì)血管平滑肌上胰島素受體的功能和表達(dá)的影響,以及這種作用在WKY(Wistar-Kyoto,正常血壓對(duì)照大鼠)和(Spontaneously hypertensiverat,SHR)的區(qū)別。
　　 三、研究方法
　　 1.胸主動(dòng)脈平滑肌(A10)細(xì)胞的培養(yǎng):
　　 2.細(xì)胞增殖試驗(yàn)采用[3H]-TdR,MTT,細(xì)胞計(jì)數(shù);
　　 3.Wes

6、ternblot以及RT-PCR分析D3受體對(duì)胰島素受體表達(dá)的調(diào)節(jié)及機(jī)制;
　　 4.WKY和SHR原代VSMCs培養(yǎng),觀察D3受體對(duì)胰島素受體功能和表達(dá)的調(diào)節(jié)在WKY及SHR上的區(qū)別,探討該調(diào)節(jié)作用與EH發(fā)生的關(guān)系。
　　 四、研究結(jié)果
　　 1、胰島素促進(jìn)A10細(xì)胞增殖呈濃度依賴性;盡管D3受體本身對(duì)A10細(xì)胞增殖沒有影響,但在D3受體激動(dòng)劑PD128907和胰島素共同刺激A10細(xì)胞的情況下,PD128907

7、可抑制胰島素介導(dǎo)的促A10細(xì)胞增殖作用,此作用亦呈濃度依賴性。
　　 2、刺激D3受體,經(jīng)過(guò)PKA信號(hào)途徑,對(duì)胰島素受體表達(dá)產(chǎn)生抑制作用。D3受體特異性阻斷劑可阻斷D3受體對(duì)胰島素受體的下調(diào)作用,說(shuō)明了D3受體激動(dòng)劑PD128907的特異性,這一作用是經(jīng)過(guò)D3受體完成的。
　　 3、刺激D3受體對(duì)胰島素受體的功能和表達(dá)的抑制作用在WKY和SHR的原代VSMCs沒有明顯區(qū)別。但是,刺激D3受體對(duì)胰島素介導(dǎo)的VSMCs增殖效