原花青素對(duì)鉛誘導(dǎo)的大鼠肝毒性的保護(hù)作用研究.pdf

1、鉛(Lead，Pb)具有柔軟、高延展性和抗腐蝕等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用到現(xiàn)代工業(yè)中，尤其是在發(fā)展中國(guó)家。盡管全球范圍內(nèi)已經(jīng)采取了各種措施來(lái)控制Pb污染，但是每年仍約有2萬(wàn)噸的Pb以煙塵的形式排放到空氣中，對(duì)人畜健康產(chǎn)生巨大的威脅。約33％被吸收入血的Pb會(huì)儲(chǔ)存到肝臟中，對(duì)肝臟造成嚴(yán)重的損傷。因此，有效地減少Pb在肝臟內(nèi)的蓄積和對(duì)肝組織的損傷是亟待解決的問(wèn)題。葡萄籽提取物原花青素(Grape seed proanthocyanidin extr

2、act，GSPE)是一種天然抗氧化劑，具有抗炎、抗細(xì)菌、抗癌、保護(hù)心臟、肝臟和神經(jīng)等多種生物學(xué)作用。本研究采取體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)相結(jié)合的方法，來(lái)研究GSPE對(duì)Pb誘導(dǎo)的大鼠肝臟的損傷、在肝臟和骨中的蓄積、血細(xì)胞DNA損傷、氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡水平的保護(hù)作用。
　　體內(nèi)試驗(yàn)選用6-8周Wistar大鼠40只，隨機(jī)分成4組，分組情況為Control組、GSPE組、Pb組和Pb+GSPE組，試驗(yàn)周期為30 d。Control組大鼠自由飲水

3、，每天灌服用于溶解GSPE的生理鹽水;GSPE組大鼠自由飲水，每天灌服200 mg/kg GSPE溶液;Pb組大鼠飲水中添加2.51 g/L醋酸鉛，每天灌服生理鹽水;Pb+GSPE組大鼠飲水中添加2.5 g/L醋酸鉛，每天灌服GSPE（200 mg/kg）溶液。30d后，采取試劑盒方法檢測(cè)氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)（超氧化物歧化酶、谷胱甘肽和丙二醛）、細(xì)胞凋亡和DNA損傷，生化分析儀測(cè)定肝功能指標(biāo)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotrans

4、ferase，ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase，AST），采用血球分析儀測(cè)定紅細(xì)胞(Red blood cell，RBC)數(shù)量和血紅蛋白(Hemoglobin，Hb)濃度，火焰原子吸收光譜法測(cè)定肝臟和骨中的Pb含量，免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)Nrf2信號(hào)通路和細(xì)胞凋亡信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　體外試驗(yàn)原代培養(yǎng)Wistar大鼠肝細(xì)胞，經(jīng)糖原染色鑒定肝細(xì)胞后，分別進(jìn)行Pb和GSPE添加，分組如下:C

5、ontrol組、GSPE組(100 mg/L)、Pb組（100μM）和Pb(100μM)+ GSPE(100 mg/L)組，GSPE先添加2h，然后加入Pb孵育24 h，采用試劑盒的方法，按照說(shuō)明書(shū)提供的方法檢測(cè)肝細(xì)胞活率、乳酸脫氫酶釋放和肝細(xì)胞活性氧（Reactive oxygen species，ROS）水平。
　　結(jié)果表明:GSPE能夠緩解Pb誘導(dǎo)的RBC數(shù)量下降和Hb濃度的降低。由ALT、AST活性和肝組織病理切片結(jié)果可見(jiàn)

6、，GSPE的添加有效地減弱Pb對(duì)肝臟的損傷。與Control組相比，Pb組超氧化物歧化酶和谷胱甘肽水平顯著降低，丙二醛含量顯著增加，這些指標(biāo)提示機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，而GSPE減弱了Pb誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。Pb組肝臟和骨中Pb含量增加，GSPE處理后骨中的Pb蓄積明顯降低;同時(shí)，GSPE降低了肝細(xì)胞凋亡水平和DNA損傷程度。Pb+GSPE組Nrf2通路相關(guān)蛋白Nrf2、Keap1、NQO1和HO-1蛋白表達(dá)顯著高于Pb組。與Pb組相比，GS